Пятна на экране ТВ: причины, как убрать

Современная ТВ-техника радует чёткой и реалистичной картинкой, но, так же как и в случае со старыми аналоговыми телевизорами, она обременена своими специфическими проблемами. Одна из самых распространённых неприятностей – появления пятен: чёрных, светлых или цветных.

Всё это явно не способствуют комфортному просмотру контента, указывая на неисправность техники. Разберёмся с причинами появления пятен, последствиями и рассмотрим варианты решения подобных проблем. Информация будет актуальна для плазменных, ЖК и LED-телевизоров.

Почему на экране появляются пятна

Для начала рассмотрим общие проблемы, свойственные для всей современной ТВ-техники вне зависимости от её типа. Благо их гораздо меньше, чем у старых аналоговых телевизоров, потому как за корректную визуализацию отвечает хоть и достаточно сложный, но всего один элемент – матрица.

Заводской брак

Этим грешат не только бюджетные, но даже премиальные модели именитых брендов – Samsung, LG, Philips и прочие.

Совет! Единственный вариант избежать заводского брака – это тщательнейшим образом проверять технику в момент покупки.

Почти в каждой прошивке есть специальный софт – сетки, направленные на выявление битых пикселей (чёрных и белых точек), пятен и прочих недочётов. Если же заводской брак был обнаружен дома при покупке через интернет-магазин, то продавец в любом случае обязан заменить товар.

Физические повреждения

Сильное нажатие или удар по экрану телевизора могут стать причиной появления цветных пятен. Причём битые пиксели могут распространиться на оставшуюся часть матрицы, что свойственно для бюджетных моделей, где отсутствует независимая защита для каждого сектора. Такого рода повреждения исключают какой-либо ремонт – только замена матрицы.

Попадание влаги и воздуха внутрь матрицы

Здесь может быть нарушение правил транспортировки продавцом или неправильная эксплуатация пользователем техники. Даже несколько капель воды или частичек пыли, попавшие в тело матрицы, могут стать причиной появления неприятных пятен на ЖК-экране телевизора.

Высокие температуры

Если рядом с ТВ-техникой находится обогреватель или другой сильный источник тепла, то матрица может расслоиться у ЖК-устройств, или же вовсе перестать работать, если это плазменная панель. В этом случае появляются небольшие засветы, которые постепенно заполняют всё экранное пространство.

Форма и цвет пятен также могут многое сказать о характере проблемы, что позволяет сразу приступить к её решению. К примеру, у старых аналоговых телевизоров разноцветные пятна говорят о чрезмерном намагничивании экрана. Для устранения этой неприятности достаточно просто перенести устройство в другое место, подальше от воздействующей на него электромагнитной техники.

Жёлтые пятна указывают на уже начавшийся процесс расслоения матрицы, что свойственно для бюджетных моделей, которыми активно пользовались более 5 лет. Более дорогая ТВ-техника в большинстве своём лишена подобных проблем.

Как убрать тёмные пятна

«Рваные» яркие пятна на телевизоре тёмного цвета, расположенные практически по всему экрану, указывают на нарушение работы поляризатора или рассеивателя, которые расположены в теле матрицы. Самостоятельно устранить такой дефект под силу только специалисту, в распоряжении которого есть соответствующий инструмент и оборудование.

Тёмные пятна на экране ЖК-телевизора правильной формы – круглой или овальной, со спадающей интенсивностью ближе к краям фигуры, скорее всего, вызваны попаданием пыли в матрицу. Чаще всего такое происходит из-за резких температурных колебаний. Слои матрицы начинаются двигаться, и в освободившееся пространство проникают пылинки.

Но иногда причиной попадания посторонних частиц могут быть конструкционные недоработки. Последние довольно часто наблюдаются на ультрабюджетных моделях от малоизвестных фирм. Но и крупные производители также совершают промахи. К примеру, компания Samsung отозвала целую серию неудачных моделей, которые буквально всасывали пыль и прочую грязь своей вентиляционной системой. Перед покупкой явно нелишним будет почитать отзывы о той или иной модели телевизора вне зависимости от авторитетности производителя.

В доброй половине случаев убрать такие пятна можно своими силами.

1. Укладываем телевизор на мягкую поверхность тыловой стороной вверх.
2. Раскручиваем винты крепления задней стенки и аккуратно её снимаем.
3. С помощью пылесоса, поставленного на выдув, или баллона со сжатым воздухом продуваем все края матрицы, направив струю воздуха под наклоном.
4. Выжидаем 5-10 минут и ставим крышку телевизора на место.

Важно! Во время продува необходимо исключить замятие краёв матрицы. Если поток воздуха слишком сильный, то во время процедуры инструмент нужно отдалить на некоторое расстояние.

Если черное пятно от проникшей внутрь пыли совсем небольшое, то от него можно попробовать избавиться более лёгким способом. Берём сухую мягкую тряпку и, обернув её на палец, постукиваем по экрану. Мелкие частички должны упасть.

На плазменном телевизоре такие проблемы решаются, увы, только одним способом – вызовом мастера на дом или походом в сервисный центр. Удалить чёрные пятна своими силами в этом случае нельзя. Здесь необходимо дорогостоящее оборудование и специальный инструмент.

Удаляем светлые пятна

Если на экране телевизора появились белые пятна в формате «звёздного неба», то, скорее всего, вышел из строя отражатель или рассеиватель. Проблема проявляется спустя некоторое время после покупки устройства. Геометрия рисунка может постепенно меняться и захватывать оставшуюся часть экрана. Замена сломанных элементов не представляется возможным в домашних условиях, поэтому лучший вариант — обратиться к специалистам, в распоряжении которых есть необходимое для ремонта оборудование.

Иногда возникают проблемы с подсветкой. Последняя может быть распределена неравномерно и местами менять оттенок. Чаще всего это проявляется появлением еле заметных светлых пятен. В некоторых случаях проблема решается достаточно легко. Дело в том, что задние стенки некоторых моделей телевизоров настолько сильно затянуты, что приводит к деформации матрицы, отчего и появляются светлые пробелы. В этом случае необходимо положить телевизор экраном вниз на мягкую поверхность и открутить винты, после чего затянуть их по новой, но уже не так сильно.

Ещё одна причина возникновения ярко выраженных белых пятен – жидкость в матрице. Попадает она туда чаще всего через вентиляционные отверстия (случайно пролитый напиток, полив цветов по соседству) и реже как следствие конденсата. Хорошо если это обычная вода: она просто высохнет через некоторое время, и проблем не будет. Но если это чай, кофе или алкогольные напитки, то дело заметно усложняется.

Важно! Процедура очистки матрицы достаточно трудоёмкая и требует определённых знаний в этой области. Новичкам настоятельно рекомендуется обратиться к специалистам.

При наличии опыта работы с техникой, избавиться от посторонней жидкости можно и своими силами.

1. Снимаем заднюю крышку телевизора, предварительно положив его на мягкую поверхность.
2. Извлекаем матрицу отсоединив все шлейфы.
3. Окунаем её в заранее подготовленную тару с тёплой очищенной водой и оставляем отмокать пару часов.
4. После протираем все видимые части салфеткой из микрофибры.
5. Окончательно высушиваем феном с тёплым воздухом.
6. Ставим матрицу на место в обратном разборке порядке и закрепляем заднюю крышку.

Включать телевизор можно только через час после сборки.

Что делать, если на экране телевизора появляются пятна

Характерные тёмные или светлые пятна появляются на экране телевизора, если повреждена матрица, рассеиватель или элементы подсветки. Также тёмные пятна могут проявляться как «битые» пиксели — что интересно, определённое их количество иногда заведомо ожидается при сборке, и существует даже метод стандартизации ЖК-экранов по количеству ожидаемых «битых» пикселей, от 0 вплоть до 50 на 1 млн. в матрице.

Взглянем, как именно появляются такие пятна, как обращаться с техникой, чтобы избежать их появления, и что делать, если они всё-таки появились.

Почему на экране появляются пятна

Внешняя сторона экрана современного ЖК-телевизора — матрица — состоит из слоёв полимерных материалов разного типа: несколько слоев поляризатора; стекло или заменитель стекла; слои материала, покрытого жидкими кристаллами; антибликовое покрытие. За матрицей лежат ещё несколько слоёв похожих пластин — рассеивателей, за которыми находятся источники освещения.

Оговоримся, что в статье будут рассматриваться случаи, в которых тёмное или светлое пятно появилось на экране ещё недавно «здорового» телевизора. Если вы только распаковали и установили устройство, включили его в первый раз и уже видите «мёртвую» зону на экране — бегите сломя голову обратно в магазин и добивайтесь замены. Физические повреждения, полученные при транспортировке, и заводской брак — «серые» зоны законодательства, но, как правило, если вы точно уверены, что повреждение возникло именно по вине магазина, настаивайте на экспертизе: по умолчанию она проводится за счёт производителя.

«Битые» пиксели

Условно в этой неполадке можно выделить ещё два подтипа: рабочие пиксели, показывающие неправильный цвет, и полностью «мёртвые», чёрные участки.

Полностью чёрный пиксель, не реагирующий на прикосновение (то есть не являющийся другим типом чёрного пятна, который мы рассмотрим ниже), обозначает, что перегорел транзистор, отвечающий за управление этим участком экрана. Придётся или мириться с чёрной точкой, или нести телевизор в ремонт. Узнайте, возможен ли ремонт по гарантии — шансы маленькие, но в матрицах высшего класса наличие битых пикселей недопустимо. К сожалению, таких в продаже удивительно мало, а для остальных это не гарантийный случай — при этом стандарт матрицы часто опускается в спецификациях телевизора, доступных потребителю.

Неправильно окрашенные («застрявшие») пиксели можно попробовать вылечить самому. Виновник неполадки — перепады напряжения, а также экстремальные (как правило, очень высокие) температуры, которые могут заставить жидкий кристалл «зависнуть» в неправильной позиции. Это становится особенно заметно после долгой работы телевизора.

В отличие от предыдущего дефекта, такой тип «битого» пикселя может в своём роде «заражать» своё окружение — со временем вы увидите, что неполадка распространяется на соседние пиксели, и постепенно она может превратиться в довольно заметную полосу вдоль экрана.

Первое, что нужно сделать, — снизить температурное воздействие. Не накрывайте телевизор тяжёлой тканью, уберите его подальше от нагревательных приборов, батарей и, если возможно, от прямых солнечных лучей.

Существуют специальные утилиты, использование которых может помочь исправить неправильно работающий пиксель. Принцип их работы заключается в прогонке различных цветов через каждый пиксель экрана. Как правило, такие программы включают на много часов без остановки.

Изредка может помочь «массаж» битого пикселя. Отметьте про себя повреждённое место на экране, выключите телевизор и в течение минуты-двух аккуратно надавливайте сухой ватной палочкой туда, где находится зависший пиксель. Выждите ещё минут 10–15, после чего включите телевизор и проверьте проблемное место — зависший пиксель может прийти в норму.

Чаще всего помогает вариант с охлаждением устройства. Отключите телевизор от питания и поместите его в прохладное и сухое место на несколько часов — например, можно расчистить место на балконе зимней ночью. Охлаждение заставляет жидкие кристаллы застывать, жёстко выравнивая их ориентацию. Возвращаясь к нормальной температуре, они вернутся в своё состояние по умолчанию, свободное от пространственных дефектов.

После нахождения на холоде на экране могут быть видны разводы — дайте устройству поработать несколько часов, и они исчезнут.

ВАЖНО. В плазменных телевизорах пиксели устроены немного по-другому — и неправильно горящий пиксель также может значить «неизлечимый» сгоревший транзистор.

Черные пятна с чёткими краями или чёрные полоски, исчезающие при давлении

Такие чёрные пятна на экране телевизора могут выглядеть также как своего рода «трещина», возникшая после удара или падения с высоты. Аккуратно проведите по повреждённой поверхности чистым пальцем, чуть-чуть надавливая: настоящая трещина будет рельефной на ощупь и не исчезнет от давления. Про то, почему вдруг возникают трещины на экране и как их можно исправить, у нас есть отдельный материал.

Если же неполадка исчезает при надавливании и появляется опять, стоит лишь убрать руку, мы имеем дело с разгерметизацией (расслоением) слоёв матрицы. Виной тому попадание влаги и воздуха внутрь матрицы — а иногда это может спровоцировать даже маленькая пылинка, случайно оказавшаяся между слоями.

Сероватые пятна с чёткими краями, не закрывающие изображение (но заметные на его фоне), обычно обозначают дефект поляризатора — если провести экспертизу, можно добиться замены экрана по гарантии.

Тёмные пятна с размытыми краями

Такие пятна обычно возникают по периметру экрана и делают экран похожим на подсвеченный ночью билборд — пятна конусообразные, без чётких краёв и выглядят как «затемнение» части экрана. Обычно так и есть — это признак того, что вышла из строя часть подсветки, расположенной за матрицей.

Тёмные пятна неправильной формы с размытыми краями, возникающие по центру экрана, могут указывать на брак (или расслоение) плёнок рассеивателя.

Светлые пятна с размытыми краями

Такие светлые пятна на экране телевизора часто появляются сразу по несколько штук, имеют правильную форму и выглядят так, будто изнутри кто-то светит сквозь экран фонариком. Как правило, это значит дефект (или расслоение) плёнки рассеивателя или отражателя, либо выход из строя светодиодных линз. Проявляется дефект обычно после долгой работы телевизора или под воздействием нагрева.

Синие или фиолетовые пятна

Фиолетовое пятно на экране телевизора появляется при неисправном светодиоде — скорее всего, придётся менять панель подсветки. Обычно яркий фиолетовый или синий свет в первую очередь появляется по углам экрана.

Светлые пятна с чёткими краями

Белые пятна на экране телевизора, закрывающие собой изображение, указывают на расслоение матрицы — аналогично чёрным, но отслаивается уже вторая поляризационная плёнка. Возможно, неисправен один или несколько шлейфов подключения матрицы.

Разноцветные (радужные) пятна

Цветные пятна на экране значат, что, вероятно, вышла из строя главная плата вашего телевизора. Придётся нести его в ремонт — к счастью, эту плату можно починить относительно бескровно. У кинескопных телевизоров такой дефект обычно значит намагничивание экрана или неисправный позистор.

Как убрать тёмные пятна

В редких случаях тёмное пятно, возникающие на экране ЖК-телевизора от расслоения матрицы, может исчезнуть само: плёнка поляризатора может со временем вновь начать прилегать к остальным слоям матрицы. Но обычно всё происходит с точностью до наоборот: небольшой участок, куда попал воздух или вода, напрягает всю остальную плёнку, со временем вызывая её дальнейшее отслоение и увеличение пятна.

Теоретически матрицу можно разделить на слои и собрать обратно, удалив пузырь воздуха, пылинку или мокрое пятно. На практике с такой задачей придётся обращаться в специализированные мастерские, лучше, конечно, фирменные: неисправность телевизора Samsung исправят быстрее в мастерской Samsung, а с пятнами на экране LG разберутся лучше именно в мастерской в LG. Ещё лучше — купить и установить новую матрицу.

Тёмные пятна на плазменном телевизоре могут также обозначать проблему с блоком постройки изображения.

Удаление светлых пятен

Если у пятен размытые края, уменьшите яркость экрана — это продлит ему жизнь, но подсветку всё равно придётся рано или поздно поменять. Светлые «битые» пиксели можно попробовать устранить по методике, описанной в соответствующем разделе. Светлое пятно на экране телевизора с расслоившейся матрицей по своей сути аналогично чёрному — проблема решается разбором-сборкой матрицы либо её заменой.

Когда необходима замена экрана

Самостоятельно можно исправить проблемы с неправильно работающими пикселями и, в исключительно редких случаях, с разгерметизацией экрана. Все остальные типы пятен на экране на практике, к сожалению, обозначают замену матрицы либо подсветки.

Надеемся, эта статья помогла вам по крайней мере выявить причину поломки экрана вашего телевизора. Может быть, у вас вышло и «оживить» неправильно работающие пиксели? Задавайте свои вопросы — мы с радостью ответим на ваши комментарии.

почему появились засветы на новом телевизоре и что делать?

Бывает, что на экране телевизора можно заметить какие-то засветы, которые сильнее всего видны по краям экрана и в углах. Многих пользователей сильно тревожат подобные находки. В сегодняшней статье мы поговорим о том, откуда берутся белые пятна на экране телевизора и что с ними делать.

Причины появления

Пятна на жидкокристаллическом (ЖК) мониторе или телевизоре чаще всего появляются в процессе эксплуатации техники. От такой неполадки не застрахован ни один экран даже самой дорогой фирмы. Главной причиной появления таких погрешностей считается заводской брак.

Но пятна бывают разные. Случается так, что при просмотре телевизора в некоторых местах экрана (при наличии в какой-то зоне определенного цвета) можно разглядеть еле заметные белые засветы.

Эта ситуация может случиться с любым ЖК, LED или плазменным экраном. Но не спешите бить тревогу, такое изображение может быть особенностью данной модели, а не ее дефектом.

В редких случаях такие «пятна» являются конструктивной особенностью. К ним же могут относиться тонкие полоски по краям экранов на пару тонов светлее остальной поверхности. Некоторые, не искушенные хорошим изображением люди, могут годами не замечать такие недочеты, а придирчивый пользователь сразу их обнаружит. В иных случаях подобные пятна могут появиться во время эксплуатации телевизора, и у каждого типа экрана могут быть свои причины их появления.

ЖК и LED экраны

Причиной появления белых участков на экранах такого типа может быть:

• некорректная сборка устройства – если матрица установлена с перекосом, то могут появиться подобные дефекты;
• физическое воздействие на поверхность экрана (нажим или удар по нему).

В любом из описанных случаев придется полностью менять матрицу.

Плазма

У плазменной панели тоже бывают такие недочеты, только тут проблема кроется в неисправности блоков, которые отвечают за постройку картинки. В редких случаях это может быть дефект самой матрицы. Чтобы устранить такую неполадку, потребуется заменить блок постройки изображения.

Как только вы заметили проблемы с изображением, и если гарантийный срок еще не вышел, то желательно сразу отправить изделие в сервисный центр для ремонта или замены. Стоит отметить, что иногда совсем маленькие и не сильно бросающиеся в глаза пятна не всегда могут быть расценены как гарантийный случай и в ремонте откажут.

Как избавиться?

Области с неравномерной яркостью иногда могут быть исправлены 2 способами:

• несильным надавливанием;
• регулировкой яркости и контрастности.

Рассмотрим подробнее каждый из способов.

Ручное исправление

Для того, чтобы выправить эту неполадку вручную, нам потребуется мягкая ткань. Выключите телевизор и начните аккуратно притирать экран от центра к краям.

Повторите процедуру несколько раз, пока участок с дефектом не пропадет.

В некоторых моделях задние винты, которые удерживают переднюю рамку вместе с задней, сильно перетянуты на заводе-изготовителе, что и вызывает деформацию экрана и появление засветов по периметру. Чтобы исправить это,

открутите все винты по периметру примерно на ¼ оборота. Таким образом снимите лишнюю нагрузку с матрицы.

Регулировка яркости в настройках

Откройте меню настроек при помощи пульта дистанционного управления. Теперь потребуется перейти к разделу, который отвечает за настройку яркости изображения. Далее нужно выставить уровень подсветки на минимально допустимый уровень.

В некоторых моделях телевизоров подсветка может быть полностью отключена без ухудшения качества изображения. Отключите все настройки, которые регулируют яркость в зависимости от освещения в комнате.

Это отключит параметр контроля, который необходим для уменьшения видимости погрешностей на экране во время просмотра.

Бывают случаи, когда на экране появляются маленькие точки. Скорее всего, это попавшая между слоев пыль. И такие ситуации возникают очень часто во время ремонта в комнате, где находится телевизор, или во время переезда. Это не всегда заводской брак, поскольку все экраны оснащены вентилируемым зазором между слоями – бывает, что в это расстояние попадает всякий мелкий мусор. Чтобы не разбирать экран, пользователи нашли несколько выходов из такой ситуации.

Первый способ противоречит всем правилам пользования подобными устройствами, однако, многие им пользуются в домашних условиях и довольны результатом. Суть этого способа заключается в аккуратном выбивании пылинки из экрана. Чтобы не повредить прибор, нужно взять что-то, что будет гасить силу удара, и распределять его равномерно. Подойдет шерстяной шарф или свитер. Намотав его на руку, нужно начать наносить легкие удары по экрану рядом с местом, где находится инородное тело.

Такой метод можно назвать «варварским», но им пользуются и вполне успешно.

Более щадящий вариант – извлечение инородного предмета из слоев экрана, придумали его тоже в домашних условиях. Предмет извлекают при помощи пылесоса, только, как и с предыдущим методом, тут главное не перестараться и держать шланг пылесоса на расстоянии.

Когда необходима замена экрана?

Чаще всего заменить экран требуется после серьезных механических повреждений, когда ремонт нецелесообразен или стоит гораздо дороже новой матрицы. Такое бывает в случае сильного удара по экрану или его падения. Такие пятна имеют четкую границу удара, а также следы трещин. Некоторые новые экраны могут проявлять расплывчатые контуры, это вызвано тем, что

находящиеся рядом пиксели начинают перегорать от избыточного напряжения.

О том, окуда появляются пятна на экране телевизора, смотрите далее.

Темное пятно на экране ЖК телевизора

Почему появляются пятна на телевизоре? Есть несколько причин. Каждую из них детально рассмотрим, а потом проанализируем проверенные способы устранения подобных дефектов. Чтобы избежать появления затемнений, черных и цветных пятен, полос, соблюдайте условия эксплуатации техники.

Многие пользователи не уделяют должного внимания уходу за жидкокристаллическим экраном. Необходимо протирать дисплей телевизора хотя бы несколько раз в месяц. Такая превентивная мера позволит избежать появления различных дефектов.

Избирательным нужно быть в вопросе чистящих средств. Например, нельзя использовать косметические влажные салфетки, средства на основе спирта, не предназначенные для ухода за ЖК экраном. Сейчас же перейдем к рассмотрению основных причин появления пятен на дисплее.

Заводской брак

Если экран работает, но при этом появилось яркое свечение, то это первый признак, свидетельствующий о производственном браке. Матрица неисправна. Если на телевизор еще действует гарантия, то лучше его обменять. Поскольку ремонт – слишком дорогостоящее удовольствие.

Дефект проявляется не сразу. Яркое свечение возникает после неоднократного нагрева. Специфика поломки заключается в том, что нарушена геометрия слоев матрицы. Причиной неисправности стала неправильная установка рассеивателя и отражателя.

Если на экране появилось темное пятно, то это также может говорить о производственном браке. Сначала дефект проявляется в виде незначительных точек. Такой симптом свидетельствует о несоблюдении на производстве технологии установки экрана.

Небольшие белые пятна на экране телевизора со временем постепенно темнеют, а также увеличиваются их масштабы. Обратитесь в сервис-центр, чтобы мастера починили неисправное устройство или поменяли поврежденную матрицу.

Что делать, если срок гарантия завершился? Если вы пользуетесь телевизором от именитого бренда: Samsung, Sony, LG, то не исключено, что компания захочет сохранить свою репутацию и пойдет вам навстречу. Однако такой сценарий возможен только при условии, что не было механических повреждений ТВ и соблюдались правила ухода за техникой.

Отдельно стоит поговорить о наличии программного обеспечения для восстановления битых пикселей. Впрочем, использование специального софта будет оправдано в только в том случае, если не повреждены субпиксели.

Пыль и мелкий мусор

Белые пятна на экране ЖК телевизора возникают в результате проникновения частиц пыли в слои матрицы. Это также свидетельствует о несоблюдении геометрии слоев. Регулярные температурные колебания (телевизор постоянно нагревается, а потом остывает) приводят к движению слоев. Из-за этого в слои матрицы попадает пыль и другой мелкий мусор. Спустя 2-3 месяца могут появиться черные точки или большое черное пятно.

Эксперты настоятельно рекомендуют своевременно протирать жидкокристаллический дисплей. Необязательно использовать специальные влажные салфетки или специальные аэрозоли. Оптимальный способ устранения пыли – продувка. Это исключает вероятность появления повреждений на матрице.

Не только пыль может застрять между слоев матрицы. Не исключено, что там окажутся и более крупные частицы. Встречаются случаи, когда между слоями застревают насекомые. Впрочем, это скорее исключение, свидетельствующее о заводском браке.

Крупные частицы пыли, и другие загрязнения удаляются следующим образом:

1. Возьмите сухую и мягкую тряпку.
2. Легко постукивайте по дисплею.
3. Частицы пыли будут постепенно отпадать.

Почему нельзя просто протереть экран? Во-первых, могут появиться разводы, от которых чрезвычайно сложно избавиться в дальнейшем. Во-вторых, если геометрия слоев действительно нарушена, то протирание только усугубит проблему.

Чтобы пыль не застряла между слоев LED телевизора, нужно легонько стучать по центру дисплея. Постукивания по краям могут усугубить проблему.

Пятная от удара

Темные пятна на телевизоре – следы механического повреждения. Такие дефекты появляются в том случае, если ТВ-устройство упало или произошел удар дисплея, сильное механическое воздействие. Пятна имеют очень четкие контуры.

Внутренний нагрев телевизора усугубляет поломку. Поскольку соседние пиксели также повреждаются. Починить дисплей телевизора Самсунг или LG невозможно, обратитесь в сервис-центр, чтобы мастера поменяли матрицу. Впрочем, это тоже финансово затратная процедура.

Если на экране плазмы или ЖК телевизора появились темные пятна, вызванные механическим повреждением, рациональней купить новую технику. Ремонт обойдется примерно в 50% номинальной стоимости ТВ.

Пятна от жидкости

Отличить пятно на экране телевизора, вызванное попаданием обильного количества жидкости от затемнения, которое появилось из-за пыли, чрезвычайно просто. Дефекты появляются, если на дисплей попал алкоголь, чай, кофе, сок или самая обычная вода.

Что делать, если на дисплее образовалось такое пятна? Промойте экран кипяченой воду (комнатной температуры) или очищенным спиртом.

Устраняются пятна, которые появились из-за жидкости, в комнате без пыли и сквозняков. Обязательно промывайте дисплей в перчатках, чтобы не усугубить поломку.

Темные полукруглые пятна по краям

Темное пятно на экране ЖК телевизора свидетельствует о поломке элементов светодиодной подсветки. Это локальное затемнение. Дефекты такого типа появляются в углу экрана. Устраняется неисправность путем замены перегоревшего светодиода.

Если ранее разборка телевизора не проводилась, а также не закончился гарантийный срок, тогда замена неисправных элементов светодиодной подсветки будет осуществлена бесплатно.

Как избавиться от пятен

Основные способы ухода за жидкокристаллическим экраном были рассмотрены ранее. Мы предложили несколько действенных способов, направленных на исправление конкретных дефектов. Есть и другие хитрости, позволяющие удалить пятна, которыми мы поделимся с вами:

1. Если пятно появилось в результате механического повреждения, то устранить его не удастся. Единственный выход – замена поврежденных комплектующих.
2. Потекшая матрица – еще один признак того, что восстановить аппаратный модуль не удастся. Если гарантия не закончилась, тогда ремонт телевизора будет проведен бесплатно.
3. Что делать, если пыль уже просочилась между слоями матрицы, а обычные постукивания по экрану не дают результата? Купите специальную салфетку для ЖК дисплеев, сделанную из микрофибры, а также приобретите аэрозоль для очистки экрана. Распылите аэрозоль на салфетку, а потом протрите телевизор.
4. Если ТВ был залит жидкостью, то на гарантийный ремонт надеется не стоит. Впрочем, можно самостоятельно промыть экран. Смешайте уксус, кипяченую воду и очищенный спирт, а потом протрите дисплей, используя мягкую сухую салфетку (желательно из микрофибры).
5. Продувать слои матрицы можно с помощью бытовой техники. Многие пылесосы оснащены подходящими для этой процедуры насадками. Главное, не подносите слишком близко насадку к экрану. Продув осуществляется на дистанции.

Теперь вы знаете, как убрать появившиеся на экране пятна самостоятельно. Далеко не всегда можно решить проблему, используя подручные средства. Например, если дефект появился из-за механического повреждения или перегорела светодиодная подсветка, тогда обратитесь за помощью к специалистам.

Черные пятна на плазменном телевизоре. Цветные пятна на телевизоре.

В основном, белые пятна на экране телевизора появляются из-за неисправностей внутренних модулей телевизора, но в редких случаях, могут быть особенностью вашей модели телевизора.

Если узкие полосы идут по краям экрана, скорее всего, это особенность данной модели и нет причин для переживания. Другое дело, если это сильно заметные светлые пятна на экране телевизора (обычно их видно с краю экрана) — это уже свидетельствует о поломке ТВ.

Если телевизор на гарантии , и вы обнаружили подобные дефекты на экране, правильным решением будет обратиться в гарантийный сервис.

Возможные причины появления пятен

Телевизоры с кинескопом

На телевизорах с электронно-лучевой трубкой этот дефект заметить просто — пятна, как правило, крупные. Вызывать белые пятна может неисправный блок кадровой развертки, который мастер может починить. Также засветы может давать «севший» кинескоп, который восстановлению не подлежит.

Плазменные ТВ

В плазменных телевизорах белые пятна на экране появляются, в основном, из-за выхода из строя блоков постройки изображения. В некоторых случаях так себя проявляет неисправная матрица.

Телевизоры с ЖК экраном

Белые пятна на ЖК телевизорах могут быть следствием плохой сборки модели или механического воздействия на экран. В обоих случаях устранит дефект только замена матрицы.

Причины . Достаточно часто встречающаяся неисправность — появление цветных пятен на экране кинескопного (ЭЛТ) телевизора.

Практически всегда, эта неисправность означает намагничивание экрана.

Иногда неисправность можно своими силами устранить, а иногда это поломка телевизора и необходимо вызывать мастера по ремонту.

Важно. Если цветные пятна появились после падения телевизора или удара по нему, то, скорее всего, вышел из строя кинескоп. В настоящее время чинить это либо невозможно либо крайне дорого.

— Так как техника, стоящая рядом с телевизором, может создавать наводки, то сначала стоит ее передвинуть на «безопасное» расстояние.

— Редко случается так, что телевизор поставлен в неудачное место. Все-таки можно попробовать переместить аппарат в другое место и там его включить. Это может помочь убрать пятна с экрана.

— Самый надежный способ убрать намагничивание экрана — выключить телевизор сетевой кнопкой, выдернуть вилку из розетки и подождать 20 минут. Потом включить телевизор снова. Желательно повторить это действие дважды.

Если двойное «выключение-отдых-включение» не помогло, вероятнее всего, в телевизоре неисправна схема размагничивания. Поломка достаточно простая и чинится мастером практически всегда.

Каждый владелец телевизора с жидкокристаллическим дисплеем может столкнуться с проблемой, когда появляются тёмные пятна на экране телевизора. Они могут появиться как у недорогой техники, так и у обладателей элитных моделей. Данный вопрос очень распространён среди ЖК моделей, однако, не каждый знает, почему они появляются. Рассмотрим эту проблему поподробнее.

Тёмные пятна – это умершие (нерабочие) пиксели на матрице. Они свидетельствуют о неисправности дисплея в данной области и на экране могут появляться из-за множества причин.

Причины появления

В основном, появление тёмных пятен – это заводской брак. Но не всегда эта проблема возникает из-за брака на производстве. Давайте разберём основные причины темных пятен на экранах ЖК телевизоров:

• Брак на производстве . Если вы только что приобрели новый телевизор и обнаружили пятнышко на дисплее, тогда с большой вероятностью можно сказать, что это заводской брак. Эта самая распространённая причина в появлении пятен.
• Механическое воздействие . В таком случае, тёмная область образовалась в ходе неправильной эксплуатации техники. Например, вы сильно надавали рукой на дисплей или ударили обо что-то экран. Это и могло вызвать подобную проблему.
• Попадание воздуха . С такой причиной, владельцы телевизоров, также, встречаются очень часто. Воздух мог попасть при перевозке или переносе устройства, что и вызвало отказ в работе пикселей.
• Попадание влаги . Не исключён и такой вариант. Не рекомендуется протирать экран очень мокрой тряпкой либо использовать большое количество средств очистки. Жидкость может попасть под слои матрицы, что приведёт к появлению пятен.
• Воздействие высокой температуры . Нерабочая область могла образоваться вследствие воздействия высокой температуры. В таком случае происходит расслоение матрицы, что и приводит к данной проблеме.

Как устранить пятна

В большинстве случаев, самостоятельно отремонтировать повреждённый участок экрана практически невозможно. Для этого необходимо специальное оборудование и немалые навыки в ремонте. Но прежде чем впадать в панику, рекомендуем прочитать следующие советы:

• Если у вас остался гарантийный талон на товар и его срок не истёк, тогда обратитесь в магазин, в котором была произведена покупка. Товар заберут и отправят на выяснение причины появления неисправности. Если анализ покажет, что повреждение не является механическим, вероятнее всего, вам вернут деньги или просто дадут новый товар.
• Если же тёмное пятно вызвано физическим воздействием в ходе неправильной эксплуатации, вероятнее всего, что магазин откажет вам в возврате. В таком случае, не рекомендуем отдавать его в ремонт. Цена на ремонт такой проблемы может практически достигать стоимости самого телевизора.

Совет: покупайте технику только известных и проверенных брендов. Такими является техника от LG, Samsung, Sony и многих других.

Среди современных цветных кинескопных телевизоров довольно распространена неисправность позистора в схеме размагничивания кинескопа.

Внешне неисправность позистора может проявляться следующим образом:

Такая неисправность иногда вводит людей в заблуждение, что приводит к неверному мнению о том, что неисправен кинескоп телевизора. На самом же деле кинескоп полностью исправен, просто сильно намагничен.

Намагниченность кинескопа может появиться, если телевизор долго не отключали от электросети, т.е. аппарат долгое время работал или находился в дежурном режиме. В результате под действием магнитного поля Земли внутри кинескопа намагнитилась специальная пластина, её называют теневой маской.

Благодаря этой маске на люминофорный слой экрана проецируются три электронных луча: красный, синий и зелёный. Естественно, если она намагничена, то это вносит искажение, и лучи сводятся неправильно. Из-за этого на экране появляются участки неестественной цветопередачи.

Как работает схема размагничивания в кинескопных телевизорах?

На практике применяются две схемы размагничивания. В одной используется двухвыводной позистор, а в другой трёхвыводной. Разница небольшая, но есть. Разберём обе схемы.

Если не знаете, что такое позистор, то прочтите страничку о терморезисторах и их разновидностях .

В цветных кинескопных телевизорах с небольшими диагоналями экрана (21 и менее дюймов) схема размагничивания кинескопа реализована по довольно простой схеме. Вот взгляните.

Схема состоит из позистора (PTC) и катушки индуктивности («петли»). Она обозначена как L1. Катушка L1 представляет собой своеобразный электромагнит. Благодаря ей снимается намагниченность с маски кинескопа.

Каждый раз при включении телевизора через катушку начинает течь довольно существенный ток, амплитудой около 10 ампер и частотой электросети (50 Гц). Этот ток в катушке порождает электромагнитное поле. Оно и размагничивает маску кинескопа. Чтобы электромагнитное поле плавно и быстро затухало, последовательно с катушкой устанавливается позистор (PTC). Напомню, что при комнатной температуре, в так называемом, «холодном» состоянии его сопротивление мало и равно всего 18 ~ 24 Омам.

Под действием большого броска тока он моментально разогревается и его сопротивление резко возрастает. В результате ток в катушке («петле») уменьшается, а, следовательно, и электромагнитное поле, которое требовалось для размагничивания кинескопа. На этом всё, кинескоп размагничен.

Далее, пока телевизор работает или просто «отдыхает» в дежурном режиме, позистор в цепи размагничивания находится в «подогретом» состоянии и ограничивает до минимума ток в катушке размагничивания L1. Так продолжается до тех пор, пока телевизор не отключат от сети 220V и позистор не остынет. При следующем включении телевизора он вновь сработает совместно с петлёй размагничивания.

Данная схема размагничивания работает только при непосредственном включении сети 220 V. Если же телевизор длительное время не отключался от сети 220 V, например, находился в дежурном режиме, то естественно, схема размагничивания при включении не сработает.

Поэтому рекомендуется периодически, хотя бы раз в неделю полностью выключать телевизор (кнопкой Power или просто отключить сетевое питание, выдернув вилку из розетки). Так мы дадим возможность позистору остыть.

Также весьма распространена схема размагничивания, в которой применяется трёхвыводной позистор. Вот взгляните.

Как видим, здесь много общего с той схемой, что мы видели ранее. Работает она аналогичным образом. При включении телевизора через 2-ой позистор и катушку размагничивания L1 начинает течь большой ток. Далее сопротивление позистора резко возрастает, а ток в цепи резко падает.

Также в момент включения начинает течь ток (синяя стрелка) и через 1-ый позистор. В начальный момент его сопротивление велико и равно примерно 1,3 ~ 3,6 кОм. Позистор разогревается и его сопротивление растёт. В дальнейшем слабый ток лишь подогревает его, а, следовательно, и 2-ой позистор, который конструктивно установлен рядом с ним. Благодаря такому подогреву уменьшается остаточный ток, который протекает через 2-ой позистор уже после того, как петля размагничивания сработала. Это исключает «фоновое», слабое подмагничивание.

Стоит заметить, что в более качественных телевизорах применяется схема с трёхвыводным позистором.

Также отмечу, что у более дорогих и широкоформатных CRT-телевизоров схема размагничивания включается автоматически каждый раз при его включении. Даже в том случае, если телевизор находился в «спящем», так называемом дежурном режиме.

Рассмотрим устранение неисправности схемы размагничивания кинескопа на примере ремонта цветного телевизора DAEWOO KR21S8 .

Первоначально телевизор не включался.

После внешнего осмотра электронной платы и замены сетевого предохранителя новым, была произведена попытка включения телевизора. Сетевой предохранитель вновь сгорел, что свидетельствовало о коротком замыкании в цепях импульсного источника питания.

После замера сопротивления в электронной схеме оказалось, что в коротком замыкании виноват вышедший из строя позистор. Позистор имел низкое сопротивление в рабочем состоянии , вследствие чего образовывалась цепь короткого замыкания, состоящая из самого позистора и катушки петли размагничивания. Это и приводило к перегоранию сетевого предохранителя.

После отключения разъёма катушки размагничивания от основной платы и повторной установки защитного предохранителя телевизор стал включаться и исправно работать.

Разъём подключения катушки петли размагничивания на плате обозначается надписью D/G COIL (от D eG aussing – размагничивание).

Замена позистора

Исправен позистор или нет, можно определить внешним осмотром. Если вскрыть крышку позистора, то внутри будет две “таблетки” (в случае трёхвыводного позистора). При целостности обоих – позистор, как правило, исправен. Если одна из “таблеток” имеет трещины, отколовшиеся куски и подгорелости на поверхности , то в большинстве случаев позистор испорчен.

Также стоит отметить, что у трёхвыводных позисторов одна «таблетка» имеет сопротивление в районе 18 ~ 24 Ом. Она включается последовательно с петлёй размагничивания. Вторая «таблетка» обычно имеет меньший размер, но сопротивление её при комнатной температуре 1,3 ~ 3,6 килоОм (т.е. 1300 ~ 3600 Ом). Эта «таблетка», а точнее PTC-термистор исполняет роль подогревателя основного позистора.

У двухвыводного позистора сопротивление при комнатной температуре составляет 18 ~ 24 Ом. В этом не трудно убедиться, замерив сопротивление обычным мультиметром.

Маркируются позисторы по-разному, но многие из них взаимозаменяемы. Конструктивно же они мало чем отличаются друг от друга.

Если под рукой нет необходимого позистора, то его можно подобрать, применив вот такой совет телемастеров.

Замеряем сопротивление петли размагничивания, и подбираем позистор с близким сопротивлением. Например, если сопротивление петли 18~20 Ом, то берём позистор с сопротивлением 18 Ом. У трёхвыводного позистора низкоомной является лишь одна секция, та, которая подключается последовательно с петлёй. Её и нужно замерять. В маркировке многих позисторов указывается сопротивление петли, для которой предназначен данный позистор. Например, позистор MZ73-18RM на 18 Ом и подойдёт для петли, сопротивлением 18 Ом.

Чисто технически, неисправный позистор можно просто выпаять из платы, телевизор будет работать и без схемы размагничивания, но со временем кинескоп намагнитится, и на экране появятся разноцветные пятна. Поначалу пятна будут незаметны, и проявляться в углах экрана. В дальнейшем весь кинескоп будет в радужных разводах.

Как правило, так и проявляется дефект, когда телевизор включается, но на экране цветные пятна. В этом случае позистор просто не работает, имеет высокое сопротивление или же пропускает незначительный ток через катушку, которая и становится причиной намагниченности кинескопа.

Размагничивание кинескопа после замены позистора.

Если кинескоп намагничен не сильно , то снять намагниченность можно простым способом.

После замены позистора необходимо несколько раз произвести процедуру включения и выключения телевизора с перерывами в 15 – 20 минут. Перерывы между включениями необходимы для того, чтобы позистор остыл и его сопротивление уменьшилось . Если этого не сделать, то позистор будет иметь высокое сопротивление, и через катушку размагничивания не будет протекать ток.

Обычно процедуру включения / выключения нужно повторить 5 -7 раз, до полного исчезновения цветных пятен.

При сильной намагниченности кинескопа следует воспользоваться внешней петлёй размагничивания.

Намагниченность кинескопа в современных телевизорах легко проверить с помощью простой операции. Необходимо зайти в меню настроек телевизора и включить опцию “Синий экран” . Если эта опция включена, то при отключенной антенне или при слабом принимаемом сигнале экран заливается синим цветом вместо ряби. После того, как включили опцию “Синий экран” , отключаем приёмную антенну. При этом экран должен стать синим . Если на синем фоне есть разноцветные пятна, то экран намагничен. На фотографии показан цветной телевизор с неисправным позистором в цепи размагничивания. На большей части экрана телевизора красное пятно. Понятно, что при такой неисправности изображение на экране будет отражаться неестественно.

После замены неисправного позистора и процедуры размагничивания, о которой было рассказано, на экране чистое синее поле. Это свидетельствует о снятии намагниченности кинескопа.

И напоследок пару примеров для начинающих радиомехаников. Применение двухвыводного и трёхвыводного позистора. Примеры взяты из реальных принципиальных схем телевизоров.

DEGAUSSING COIL — это и есть та самая катушка или «петля» размагничивания.

Последовательное включение двухвыводного позистора и петли размагничивания (Rolsen C2121, шасси EX-1A).

Включение трёхвыводного позистора в цепи размагничивания (AIWA TV-C141).

Если на экране телевизора появилось темное пятно (или несколько пятен) и оно отчетливо видно, то в зависимости от типа телевизора можно сделать различные выводы.

Возможные причины неисправности

Тит телевизора и причины неисправности
ЖК, LED Темное пятно на ЖК-телевизоре практически всегда указывает на неисправность матрицы: заводской дефект; ударили или надавали на экран; иные механические повреждения матрицы. Выход один: менять матрицу.
Плазменный Темные пятна на экране плазменного телевизора могут говорить о неисправности блоков, которые строят изображение. Причиной поломки часто выступает износ деталей питания или дефект завода-производителя. Иногда блоки можно отремонтировать, заменив некоторые микросхемы. Чаще приходится менять один или два блока целиком.
Кинескопный Чаще всего, темные пятна на экране кинескопного телевизора — это результат осыпания люминофора, которое нанесено на внутреннюю сторону кинескопа и обеспечивает изображение. Такой дефект может возникнуть в результате удара или старости кинескопа. Поможет только замена кинескопа. В настоящее время либо нерентабельно, либо невозможно.

Помните, если гарантийный срок службы телевизора еще не вышел, нужно срочно обратиться в сервисный центр своего города и сдать аппарат по гарантии.

Условно-полезная информация

Народные методы устранения пятен на экране (специалисты нашей компании не отвечают за работоспособность данных методов и не рекомендуют ими пользоваться).

Альтернативные способы использования телевизоров (разборка и другие махинации с телевизорами могут быть опасны из-за остаточного напряжения, которое может привести к смерти или тяжелым травмам).

Черные пятна на экране телевизора (ЖК, LED, плазменном)

Черное пятно на экране телевизора — нечастая проблема, но одна из самых неприятных. Это связано с тем, что неполадка проявляется достаточно четко и всегда видна. Наличие неприятности не зависит от яркости картинки, контрастности и других параметров. Для восстановления необходимо вмешательство специалиста.

Заказать ремонт телевизоров в Москве и Санкт-Петербурге вы можете в сервисном центре «Аккуратный дом». У нас найдете профессиональный подход, лояльные цены, оперативность, лучшие условия сотрудничества, проведения работ на дому. Оформить выезд специалиста по городу или области можно по телефону 8(495)228-33-48, а также онлайн через заполнение формы обратного звонка.

   

Визуальные признаки неисправности

Проявление неполадок является типичным, независимо от производителя, реализации матрицы:

• Черные пятна на телевизоре могут не иметь четких границ.
• Независимо от поломки, образуют разную форму. Это круги, овалы, продолговатые области неправильной формы.
• Пятнышко бывает одно или несколько.
• Размеры могут достигать всей области матрицы.

Определить точный источник неполадки можно после диагностических мероприятий. Визуально причины выявить невозможно. Важно сразу обратиться к профессионалам для определения точных проблем и осуществления последующего ремонта.

Чтобы понимать возможные типы поломок, рентабельность их устранения, когда на телевизоре появились черные пятна, необходимо операторам сказать его тип, модель. Это позволит взять мастеру все необходимое с собой.

Распространенные причины неисправности

ЖК (LCD), LED

Темные пятна на ЖК говорят о неработоспособности матрицы. Причины дефекта:

• Заводской брак. Проявляется при нарушении правил сборки. Редкая проблема, но не является исключением для любых брендов, включая Samsung, Philips, Sony, LG.
• Оказание сильного давления на дисплей. Связано с нарушением правил эксплуатации, неправильной транспортировкой, механическими повреждениями.

Независимо от основных причин, в большинстве случаев требуется замена матрицы. Несмотря на ее высокую стоимость, выполнение работ считается рентабельным на современной технике с расширенной комплектацией. Окончательный выбор зависит от клиента.

Плазменные модели

Если на плазме появилось одно или несколько пятен — это, скорее всего, нарушение функционирования блоков, строящих изображение. Часто это происходит из-за износа элементов питания. Иногда видно белые, светлые, цветные пятна. Восстановление осуществляется путем замены блоков, которые строят видеокартинку. Стоимость зависит от цен на запчасти и трудоемкости выполнения работ.

Кинескопные устройства

В таких моделях проявление дефекта связано с кинескопом, а именно осыпанием внутреннего кинескопного покрытия. Его восстановление невозможно и нерентабельно.

Устранение выполняется путем замены всего кинескопа. Чаще всего ремонт невыгоден и требует покупки нового прибора. Но прежде, чем покупать новую технику, рекомендуем заказать диагностические работы, которые позволят точно определить источники неприятностей.

Сложности самостоятельного ремонта

Многие владельцы бытовой техники стремятся устранить неполадки своими руками, считая это выгодным решением. Но по статистике нашего сервисного центра значительная часть неисправностей связана именно с самостоятельным вмешательством, когда повреждаются смежные комплектующие, корпус, микросхемы и другие детали. Отсутствие опыта и специализированного инструмента нередко приводит к коротким замыканиям, возгораниям, травмам. Не рискуйте и воспользуйтесь профессиональными услугами.

Важно помнить, что при условии нахождения ТВ оборудования на гарантии у хозяев имеется возможность отремонтировать его бесплатно в сервисе производителя или сдать аппарат обратно продавцу при соблюдении законодательства. Любые попытки ремонта своими руками могут повлиять на преждевременное снятие гарантийных обязательств.

Что делать при выявлении поломок?

При обнаружении черных областей на экране свяжитесь с нами по номеру 8(495)228-33-48 или закажите обратный звонок. Мастер посетит ваш адрес в любое удобное время с 8 до 23 часов. Работаем в будние, выходные и праздничные дни. Позвоните нам и мы восстановим технику выгодно и оперативно.

Темные пятна на экране телевизора (ЖК, LED, плазменном, кинескопном)

Одной из распространенных неисправностей на ТВ выступают темные пятна на телевизоре. В зависимости от степени повреждения экрана пятнышки могут полностью перекрывать изображение. Это касается образования больших черных областей, а также многочисленных пятен небольшого размера. На практике такие дефекты самостоятельно не пропадают. В данном случае потребуется профессиональный ремонт. Он может коснуться как замены недорогих комплектующих, так и установки новой матрицы. Узнать точные виды работ и стоимость восстановления можно после проведения диагностики специалистами нашей компании.

Заказать ремонт телевизоров в Москве, СПб и областях можно по телефонному номеру 8(495)228-33-48 или онлайн на сайте. Ремонтные работы проводят на дому у клиента. Запчасти для распространенных брендов, включая Samsung, LG, всегда есть в наличии. Предоставляем профессиональные услуги ежедневно с 8:00 до 23:00, включая выходные, праздники.

   

Визуальные признаки

Темные пятна на экране телевизора определяются довольно легко. Их видно на светлом экране и при просмотре видеороликов. Могут иметь совершенно любую форму. Бывают овальными, круглыми, продолговатыми, неправильной формы. Образовываются в любом месте: в углу, центре, по краям. Количество зависит от степени повреждения.

Причины неисправностей зависят от типа экрана. Но важно понимать, что речь идет о темных пятнах, которые имеют относительно большие размеры. Если вас интересует устранение битых пикселей, которые не работают, ознакомьтесь с нашими другими статьями или свяжитесь с операторами.

Возможные причины неисправности

ЖК, LED модели

Когда появилось темное пятно на телевизоре ЖК или LED, нужно провести диагностику. Особенно важно это сделать, если техника находится на гарантии, так как на жидкокристаллических приборах чаще всего требуется замена матрицы.

Основными причинами выступают:

• Серьезные удары, падения аппарата.
• Оказание сильного давления на экран, нарушение правил транспортировки.
• Другие типы повреждений.

Нередко встречается заводской брак. При его наличии выполняется гарантийный ремонт в сервисном центре производителя или возвращается прибор обратно продавцу. Не следует пытаться ремонтировать телевизор самостоятельно, если не истекла гарантия.

Плазменные матрицы

Причинами выступают механические повреждения, дефекты при сборке на заводе и многое другое. Но в отличие от современных технологий в «плазмах» темные пятна образовываются и при других обстоятельствах:

• Выход из строя блоков, строящих изображение.
• Обрыв, окисление контактов после попадания влаги.
• Износ деталей питания.

В данном случае возможно выполнение недорого ремонта без замены матрицы. Все необходимые детали есть на нашем складе, в том числе для брендов Sony, Philips.

Кинескопные приборы

Основная причина образования пятнышек темного цвета на кинескопах заключается в старости оборудования. При длительной эксплуатации на внутренней поверхности осыпается люминофор, что приводит к визуальной поломке. Восстановление требует замены кинескопа на новый. Чаще из-за старости, неактуальности выгоднее купить новый телевизор.

Самостоятельный ремонт

При отсутствии опыта, специализированного инструмента ремонт своими руками не допускается. Это приводит к:

• Серьезным повреждениям корпуса и внутренних комплектующих.
• Проблемам в смежных узлах, деталях, не влияющих на образование пятен.
• Лишним затратам, покупке некачественных запчастей без сертификатов соответствия.
• Травмам, ударам током, смертельно-опасным ситуациям, включая короткие замыкания, возгорание техники.

Помните, что ТВ оборудование работает от сети 220В, включает в конструкцию сложные комплектующие, включая узлы с повышенным напряжением. Не рискуйте, выбирайте услуги сервисного центра «Аккуратный дом». Восстановим устройство на дому с предоставлением официальной гарантии.

Использование сухих пятен крови для определения концентрации невирапина и эфавиренца в плазме

Цели: Концентрации в плазме часто используются для терапевтического мониторинга антиретровирусных препаратов. Отбор сухих капель крови — удобная и простая альтернатива отбору образцов плазмы. Однако концентрации сухих пятен крови не обязательно равны концентрациям в плазме, и поэтому целью данной работы было установить взаимосвязь между невирапином и эфавиренцем в сухих пятнах крови и концентрациями в плазме, чтобы облегчить клиническую реализацию отбора проб высушенной крови.

Методы: Парные сухие пятна крови и образцы плазмы были получены от 40 ВИЧ-инфицированных пациентов, получавших невирапин, и 40 пациентов, получавших эфавиренз. Все образцы были проанализированы с использованием проверенных методов тандемной масс-спектрометрии ВЭЖХ для двух матриц. Теоретические концентрации в плазме рассчитывались из концентраций высушенных пятен крови по формуле [концентрация высушенных пятен крови / (1 — гематокрит)] × фракция, связанная с белками плазмы = концентрация в плазме.Для сравнения двух методов использовались линейная регрессия и анализ Бланда-Альтмана.

Полученные результаты: Концентрации невирапина и эфавиренца в сухих пятнах крови и плазме коррелировали хорошо (r (2) = 0,867 и 0,972 соответственно), хотя концентрации эфавиренза в сухих пятнах крови были на 39,8% (стандартное отклонение 7,1%) ниже, чем концентрации в плазме. Теоретические концентрации в плазме (с учетом гематокрита пациента) невирапина и эфавиренца были аналогичны измеренным концентрациям в плазме со средней разницей между двумя методами, равной 0.29 мг / л (стандартное отклонение 1,35 мг / л) и 0,08 мг / л (стандартное отклонение 0,31 мг / л) соответственно.

Выводы: Концентрации невирапина и эфавиренца в сухих пятнах крови были равны концентрациям в плазме после поправки на гематокрит и специфическое связывание с белками плазмы и поэтому могут использоваться в клинической практике.

Использование высушенных пятен плазмы для количественного определения йоталамата в клинических исследованиях

Clin J Am Soc Nephrol.2013 7 июня; 8 (6): 909–914.

, ^* , ^† и ^*

Эндрю С. Хейган

^* Школа медицины Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

Дэвид Р. Джонс

^† Отдел клинической фармакологии Медицинского факультета Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Раджив Агарвал

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Ричард Л.Медицинский центр администрации ветеранов Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^† Отдел клинической фармакологии, Медицинский факультет, Школа медицины Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Доктор Раджив Агарвал, Медицинский центр Университета Индианы и ветеранов, 1481 West 10th Street, Индианаполис, IN 46202.Электронная почта: ude.iupui@lawragar

Получено 12 октября 2012 г .; Принято 11 января 2013 г.

© Американское общество нефрологов, 2013 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Резюме

Предпосылки и цели

Хотя зазоры иоталамата широко использовались для измерения СКФ, необходимость транспортировки образцов плазмы в охлажденных условиях исключает его использование в ситуациях нехватки ресурсов. Пятна крови или плазмы, высохшие на фильтровальной бумаге, могут стать решением.

Дизайн, условия, участники и измерения

Используя проверенную методику ВЭЖХ, измеряли иоталамат в сухих пятнах крови различных гематокритов. СКФ измеряли в течение 5 часов у 10 пациентов с ХБП с использованием пятен высушенной плазмы и стандартных методов.

Результаты

Снижение гематокрита привело к увеличению площади распространения крови и снижению выделения йоталамата из засохших пятен крови. Однако соотношение между концентрациями иоталамата в пятнах высушенной плазмы и плазмы показало наклон регрессии, равный 0.95 (95% доверительный интервал = 0,92–0,98, P <0,001). График Бланда-Альтмана для парных точек выборки ( n = 116) показал смещение -4 мкм г / мл и пределы согласия от -38 до +30 мкм г / мл. Взаимосвязь между СКФ при использовании пятен высушенной плазмы и методами плазмы также показала отличную взаимосвязь (наклон 0,95, 95% доверительный интервал = 0,82–1,17). График Бланда-Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл / мин. Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%.

Выводы

Хотя сухие пятна крови не подходят для исследований среди пациентов с очень низким гематокритом, пятна высушенной плазмы корректируют это ограничение, и это небольшое пилотное исследование показывает, что это достаточно надежный метод количественного определения йоталамата и последующего определения СКФ. .

Введение

СКФ необходимо определить для точной оценки функции почек и стадии ХБП. Золотым стандартом для измерения СКФ считается клиренс инулина, природного полисахарида, который не секретируется и не реабсорбируется почечными канальцами (1,2).Однако инулин дорог и его не хватает; поэтому были разработаны альтернативные методы измерения СКФ (3). Одним из таких методов является измерение клиренса иоталамата (IOT) после болюсной инъекции, что обеспечивает точное и точное определение СКФ (4). Определение клиренса ВГД с помощью традиционного анализа плазмы действительно имеет ограничения, включая необходимость венозной канюляции для отбора проб больших объемов крови, а также неотъемлемые затраты на хранение и транспортировку проб.

Возможным решением вышеуказанных ограничений является использование сухих пятен крови (DBS) на фильтровальной бумаге. Фильтровальная бумага использовалась для сбора, хранения и анализа крови человека с момента ее принятия доктором Робертом Гатри для обнаружения фенилаланина при диагностике фенилкетонурии у новорожденных в 1960-х годах (5). Последние достижения позволяют шире использовать DBS в клинических испытаниях для анализа ряда небольших молекул лекарств (6–10). К преимуществам DBS по сравнению с анализом плазмы можно отнести следующие.( 1 ) Меньший объем крови (<100 µ л) на образец делает матрицу применимой к педиатрическим или тяжелобольным пациентам, где больший объем крови может быть нежелательным. ( 2 ) Для отбора проб можно использовать уколы из пальца. Этот метод сбора крови легче выполнять персоналу, и пациенты предпочитают его, а не венозную канюлю. Менее инвазивный забор крови может улучшить набор и удержание участников исследования. ( 3 ) DBS можно транспортировать и хранить при температуре окружающей среды, что устраняет необходимость в дорогостоящих морозильных камерах и транспортировке с сухим льдом.( 4 ) Антимикробная природа бумаги не требует мер по обеспечению биологической опасности при транспортировке (11). У DBS есть свои ограничения, в первую очередь неопределенность влияния уровня гематокрита крови на результаты тестов.

Гематокрит может изменять вязкость крови и влиять на результаты количественного определения с использованием DBS (12). Например, образец крови с высоким гематокритом, вероятно, более вязкий по сравнению с образцом с более низким уровнем гематокрита и может меньше растекаться на фильтровальной бумаге.В свою очередь, это может изменить количество образца, полученного при отборе пуансона фиксированного диаметра из DBS. Решением этой досадной проблемы может быть использование пятна высушенной плазмы (DPS), вязкость которого не зависит от уровня гематокрита. Соответственно, мы предположили, что ( 1 ) гематокрит будет влиять на степень растекания на фильтровальной бумаге и, следовательно, концентрация IOT в плазме, ( 2 ) DPS будет корректировать эффект гематокрита, и ( 3 ) DPS обеспечит приемлемую корреляцию с эталонным методом определения СКФ.

Метод DPS был бы наиболее полезен в группах населения, где оценка СКФ на основе уравнений креатинина сыворотки не была адекватной, например, у пациентов с циррозом или саркопенией печени или у пациентов крайнего возраста. Уравнения креатинина сыворотки не являются оптимальными при сравнении людей из разных популяций или среди пациентов с минимальным нарушением функции почек (13). DPS может подойти в вышеупомянутых ситуациях.

Целью данного исследования является описание разработки и валидации метода количественной оценки ВГД в плазме человека, приготовленной в виде DPS, детектируемого с помощью ВЭЖХ-тандемного ультрафиолета (УФ).Метод был подтвержден путем сравнения измеренной СКФ с использованием традиционного анализа плазмы.

Материалы и методы

Химикаты, реагенты, оборудование, аппаратура ВЭЖХ-УФ и метод

Химикаты, реагенты, оборудование и аппаратура ВЭЖХ-УФ были созданы с использованием ранее опубликованного метода, используемого для анализа стандартов и образцов плазмы участников (14 ). Дополнительные химикаты, реагенты и оборудование следующие. Упакованные эритроциты человека и свежезамороженная плазма поставлялись через Центр Ричарда Л.Банк крови Медицинского центра Управления ветеранов Рудебуша (Индианаполис, Индиана). Карты FTA DMPK-A, FTA DMPK-B, FTA DMPK-C, Harris 6-мм Uni-Core и 903 Specimen Protein Saver Card были получены через GE Healthcare (Бакингемшир, Великобритания).

Подготовка образца DBS

Первоначальные эксперименты показали, что результаты хроматографии аналогичны для всех фильтровальных бумаг. Карточки сохранения протеина 903 были самыми дешевыми; поэтому все эксперименты проводились с использованием этой бумаги.Используя регулируемую микропипетку, 15 мкл мкл крови были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Карточкам давали высохнуть на открытом воздухе в течение 2 часов в вертикальном положении. Карты затем переносили в эксикатор, содержащий рыхлый сухой осушитель, для дополнительной сушки в течение ночи. Диск диаметром 6 мм пробивали из пятна в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл; 100 мкл мкл подвижной фазы (85% 50 мМ натрий-фосфатного буфера, 10% метанола, 5% ацетонитрила).Образцы встряхивали в течение 60 минут, а затем центрифугировали в течение 2 минут при 14000 об / мин. Полученный супернатант переносили в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и центрифугировали в течение 6 минут при 14000 об / мин. Затем супернатант переносили в чистый сосуд, закрывали крышкой и анализировали с помощью ВЭЖХ-УФ.

Подготовка образца DPS

С помощью регулируемой микропипетки 15 мкл мкл плазмы были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Остальная часть подготовки DPS соответствует контуру образцов DBS.

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Образцы крови с определенным уровнем гематокрита (21,2% или 33,5%) получали разбавлением эритроцитов свежезамороженной плазмой. Для каждого уровня гематокрита были сделаны шесть пятен DBS, были получены цифровые изображения DBS, и площадь пятна крови была определена с использованием формулы вычисления площади с использованием Photoshop Creative Suite 5 (Adobe Systems, Сан-Хосе, Калифорния). Полные стандартные кривые были построены для каждой концентрации гематокрита путем добавления IOT и нанесены пятнами.

DPS Коррекция эффекта гематокрита у людей

Были обнаружены образцы плазмы от 10 субъектов, содержащие диапазон гематокрита (27,9–44,8), взятые в 12 точках в течение 5 часов после болюсной инъекции ВГД. Концентрации сравнивали с образцами плазмы, не нанесенными на фильтровальную бумагу и приготовленными параллельно. График Бланда – Альтмана (разница средних) использовался для анализа соответствия между DPS и традиционными плазменными методами.

Популяция исследования

Популяция исследования состояла из 10 участников в возрасте от 41 до 82 лет со средним значением (± стандартное отклонение) 65.2 ± 13,4 года. Шесть участников были мужчинами. Пять участников были белыми, а пять — черными. Девять пациентов страдали анемией легкой степени, со средним уровнем гемоглобина 11,46 ± 1,32 г / дл и средним гематокритом 34,04 ± 4,19%. Средняя расчетная СКФ составила 33,4 ± 10,1 мл / мин на 1,73 м ² (диапазон = 18–55,9 мл / мин на 1,73 м ² ). Этиология ХБП заключалась в гипертоническом нефросклерозе у четырех участников, сахарном диабете у четырех участников и обструктивной уропатии у двух участников.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ.

Были построены фармакокинетические параметры между параллельными DPS и традиционными наборами образцов участников из плазмы ( n = 10).СКФ оценивали для каждого метода и сравнивали с использованием программного обеспечения WinNonlin (Сент-Луис, Миссури) и двухфармакокинетической модели, как описано ранее (15). Опять же, график Бланда-Альтмана использовался для проверки соответствия между двумя методами.

Валидация метода: меж- и внутридневная изменчивость

Точность и прецизионность метода определяли путем анализа повторений полных стандартных кривых в течение одного и того же цикла и в шести отдельных случаях в течение 60 дней. Были определены точность и прецизионность.Прецизионность определялась путем расчета коэффициента вариации (CV) в пределах 1 дня (внутридневная точность) и между днями (внутридневная точность). Точность определялась путем вычисления процента ошибки (наблюдаемое – прогнозируемое) × 100 / прогнозируемое.

Стандарт плазмы, приготовленный до концентрации, равной половине самой низкой точки кривой (25 µ г / мл), наносили на 903 карточки ( n = 14). Были рассчитаны площади для определения обнаруживаемости и точности. Протокол был одобрен Институциональным наблюдательным советом Университета Индианы по защите людей и Комитетом по исследованиям и развитию по делам ветеранов, и каждый субъект подписал письменное информированное согласие.

Результаты

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Площадь пятен цельной крови с гематокритом 33,5% была примерно на 10% меньше, чем пятна с гематокритом 22,2% (, вставка). Неудивительно, что стандартная кривая, построенная с гематокритом крови 22,2% и 33,5%, давала различные ответные реакции площади пиков ВГД (). Как и ожидалось, по сравнению с образцами с 22,2% средние наклоны площади IOT в зависимости от концентрации в образцах с гематокритом 33,5% были на 37% больше.

Сравнение стандартных кривых концентраций иоталамата с площадью пика, измеренной с помощью ВЭЖХ, показывает, что более низкий гематокрит вызывает более низкое извлечение иоталамата. На вставке показано, что площадь, занимаемая пятном равного объема крови, больше при более низком гематокрите.

DPS Коррекция гематокритного эффекта у людей

Отношение между концентрацией IOT участников в DPS и плазме было отличным (). Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95, который значительно отличался от 1. Таким образом, по сравнению со стандартным методом отбора проб IOT, метод DPS дал среднюю концентрацию в парных точках выборки, которая была на 5% ниже по сравнению с плазма.График Бланда – Альтмана парных точек выборки ( n = 116) показал смещение от -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл (, вставка). Поскольку распределение различий не было нормально распределенным, что привело к появлению мегафонного или V-образного графика, мы вычислили логарифмически преобразованные различия. Смещение составило 1,7% (95% доверительный интервал = -22,3%, 21,0%).

Показана взаимосвязь между концентрацией йоталамата у участников, полученной стандартным методом, и пятнами высушенной плазмы. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,92–0,98. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 116), который показывает смещение -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ

Связь между расчетной СКФ в DPS и плазменных методах была превосходной (). Хотя регрессия СКФ, оцененная двумя методами, показала наклон 0.95, он не отличался значительно от 1, потому что 95% доверительный интервал наклона включал 1. График Бланда – Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл. / мин (, Врезка).

Показана взаимосвязь между оценкой СКФ с использованием пятна высушенной плазмы и стандартным методом. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,82–1,07. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 10), который показывает смещение 2 мл / мин с пределами согласия от –6 до +10 мл / мин.

Парные концентрации ионов плазмы и DPS в зависимости от времени для каждого из 10 субъектов показаны в. Большинство измерений мало различались между методами, указанными количественно в.

Соответствие между методами показано в виде динамики кривых распада иоталамата за 300 минут для каждого из 10 субъектов. Каждая панель представляет один предмет; треугольники обозначают стандартный метод, а кружки обозначают метод DPS.

Точность и прецизионность теста – повторного тестирования

Результаты тестирования – повторного тестирования показаны на.Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%. Статистически значимые, но небольшие неточности наблюдались для самых высоких и самых низких концентраций IOT. Среднее значение CV и ошибка для каждой точки стандартной кривой находились в пределах принятых критериев валидации анализа (<15%) (15). Дневные наклоны имели CV 4,7%, тогда как дневные CV наклонов составляли 3,8%. Мы измерили площадь пика с номинальной концентрацией 25 µ мкг / мл IOT в плазме. В каждом случае четко распознавался пик IOT, и площадь пика имела CV 9.7%.

Таблица 1.

Точность и прецизионность повторных испытаний

5,3 (−16,5, 10,7)

Номинальная концентрация йоталамата ( µ г / мл)	Средняя концентрация ( µ г / мл)	SD	Эффективная точность (% коэффициента отклонения)	Точность (% ошибки, 95% доверительный интервал)
Проведение дневного диагностического теста
50	48	3	2,4 (-11,3, 1,3)
100	96	7	6,9	2,7 (-10,9, 3)
200	194	26
300	300	20	6,5	2,7 (−6,8, 7)
500	511	16	3,2	5.7)
1000	1052	53	5	2.2 (-0,3, 10,8)
Производительность дневного диагностического теста
50	55	4	7,9	100 9024	103	8	7,9	3,4 (-5,2, 12)
200	212	18	8,3	3,6 (-3,3, 15,2)	31241			27	8.8	3,7 (−5,9, 13,3)
500	511	21	4	1,7 (−2,1, 6,6)
1000	1067	43 9024 (2.2, 11.2)

Мы можем быть уверены, что IOT стабильно в фильтровальной бумаге в течение 60 дней. Мы подготовили образцы DPS в первый день и повторно использовали эти стандарты для измерения межсуточной изменчивости. Наибольшее время среди измерений IOT составило 60 дней.В это время было хорошее согласие в измерении тест-повторный тест, как показано на.

Обсуждение

Результаты наших экспериментов демонстрируют разработку и валидацию простого быстрого анализа для количественной оценки концентраций ВГД и последующего определения СКФ в образцах DPS человека с помощью ВЭЖХ-УФ, показывая приемлемую корреляцию с традиционной обработкой плазмы. Некоторые выводы заслуживают внимания и будут обсуждаться.

Изменение гематокрита между образцами соответствует наблюдаемому изменению размера пятна согласованных объемов (9.8%). Большее распространение образцов с более низким гематокритом вызывает большее распределение ВГД на фильтровальной бумаге. Как и ожидалось, пробойник фиксированного диаметра, взятый из пятен с разным уровнем гематокрита, эффективно отбирает разные объемы крови. Таким образом, из образцов с более низким гематокритом извлекается более низкая концентрация ВГД. Изменение площади пика IOT не соответствует линейно увеличению площади пятна и не может быть эффективно компенсировано в этом анализе. Это открытие является особенно важным ограничением DBS при использовании у людей с ХБП, у которых может быть аномально низкий уровень гематокрита.Хотя измерение клиренса ВГД для определения СКФ у участников с тяжелой анемией не является обычным делом, по сравнению с методом DBS, использование метода DPS может дать более надежные результаты, особенно среди лиц с тяжелой анемией.

Использование плазмы на фильтровальной бумаге устраняет вариабельность уровней гематокрита за счет более сложной подготовки проб. Использование DPS требует наличия центрифуги и пробирок для сбора крови для фракционирования цельной крови. Тем не менее, подготовка образцов по-прежнему проще, чем традиционный метод плазмы, устраняя необходимость в больших объемах с помощью венозной канюли, хранения и ограничений транспортировки образцов.DPS предоставил подходящую альтернативу плазме для количественного определения концентрации ВГД в плазме у участников с ХЗП.

Важным выводом нашего исследования было то, что, несмотря на большие различия в уровнях гематокрита среди участников, не наблюдалось значительных различий в расчетной концентрации ВГД между методами. Смещение в методе парной пробы плазмы по сравнению с методом DPS было низким, а точность для каждой парной временной точки между методами находилась в пределах 15%. Кроме того, рассчитанная СКФ у участников обеспечивает точность в пределах 15% между методами, показывая, что DPS является подходящей альтернативой плазме для оценки СКФ для оценки почечной гемодинамики и стадии ХБП.

Все процессы внутридневной и междневной валидации обеспечили точность и прецизионность в рамках принятых критериев валидации анализа и показали, что аналит стабилен в фильтровальной бумаге до 60 дней (16). Площади пиков образцов в плазме всего 25 µ г / мл можно было легко визуализировать, а надежность суточного теста-повторного тестирования для оценки площади пика составляла <10%.

Ограничения этого пилотного исследования включают небольшой размер выборки участников ( n = 10). Дополнительные эксперименты с участием более крупных образцов улучшили бы статистическую мощность тестов.Дополнительным ограничением является то, что используемый в настоящее время более низкий уровень гематокрита 22,2% при сравнении распространения мажущих кровянистых выделений находится на нижних границах того, что может быть обнаружено клинически. У стабильных пациентов с ХБП меньше шансов встретить широкий диапазон уровней гематокрита. Дополнительные эксперименты, включающие более узкие диапазоны уровней гематокрита, могут быть желательными для характеристики влияния гематокрита на восстановление DBS.

Будущие эксперименты, проведенные для преодоления эффекта гематокрита, могут расширить область применения DBS для включения участников с различным уровнем гематокрита.Обнаружение известного объема и взятие всего пятна для анализа свело бы на нет эффект распределения образца и обеспечило бы анализ фиксированного объема крови.

Таким образом, мы показываем, что DBS не подходят для исследований, в которых участвуют люди с аномальным уровнем гематокрита. Тем не менее, DPS корректируют это ограничение, и они являются надежным методом для количественной оценки IOT и последующего определения GFR. Текущий метод показывает приемлемую точность, прецизионность и надежность в соответствии с общепринятыми критериями валидации.Матрица DPS может позволить осуществлять выборку групп населения, которые ранее были ограничены (педиатрические или тяжелобольные или пациенты, проживающие в отдаленных районах) из-за необходимости меньшего объема крови, а также обеспечивать более простые и экономичные средства хранения и транспортировки образцов. .

Раскрытие информации

R.A. входит в состав руководящих комитетов исследований, финансируемых Roche, Amgen, Celgene и Reata, а также в бюро спикеров Merck и Abbott, а также является консультантом Daichii Sankyo, Inc., Takeda Pharma и Sigma Tau.

Благодарность

Исследование было частично поддержано Национальными институтами здравоохранения (грант 5 U01-DK071633-05).

Сноски

Публикуется в Интернете перед печатью. Дата публикации доступна на сайте www.cjasn.org.

Ссылки

2. Флорейн К.В., Барендрегт Дж. Н., Лентес Э. Г., ван Дам В., Проджосуджади В., ван Заас Дж. Л., ван Эс Л. А., Чанг П. С. Измерение скорости клубочковой фильтрации с помощью однократной инъекции инулина. Почка Int 46: 252–259, 1994 [PubMed] [Google Scholar] 3.Agarwal R: Амбулаторное измерение СКФ с холодным йоталаматом у взрослых с хроническим заболеванием почек. Am J Kidney Dis 41: 752–759, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 4. Доулинг Т.С., Фрай Р.Ф., Фрейли Д.С., Мацке Г.Р.: Сравнение методов очистки от йоталамата для измерения СКФ. Фармакотерапия 19: 943–950, 1999 [PubMed] [Google Scholar] 5. Гатри Р., Сьюзи А.: Простой метод фенилаланина для обнаружения фенилкетонурии в больших популяциях новорожденных. Педиатрия 32: 338–343, 1963 [PubMed] [Google Scholar] 6.Мей Дж. В., Александр Дж. Р., Адам Б. В., Хэннон В. Х .: Использование фильтровальной бумаги для сбора и анализа образцов цельной крови человека. J Nutr 131: 1631S – 1636S, 2001 [PubMed] [Google Scholar] 7. Li W, Tse FL: отбор проб высушенной крови в сочетании с ЖХ-МС / МС для количественного анализа малых молекул. Биомедицинский хроматограф 24: 49–65, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 8. Нельсон К. Б., Дамброзия Дж. М., Гретер Дж. К., Филлипс Т. М.: Неонатальные цитокины и факторы свертывания крови у детей с церебральным параличом. Энн Нейрол 44: 665–675, 1998 [PubMed] [Google Scholar] 9.Патчен Л.С., Маунт Д.Л., Шварц И.К., Черчилль Ф.К .: Анализ образцов крови, абсорбированных фильтровальной бумагой, на содержание хлорохина и его основного метаболита с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием. J Хроматограф A 278: 81–89, 1983 [PubMed] [Google Scholar] 10. Спунер Н., Лад Р., Барфилд М.: Высушенные пятна крови как метод сбора образцов для определения фармакокинетики в клинических исследованиях: Соображения по валидации количественного биоаналитического метода.Анальный хим 81: 1557–1563, 2009 [PubMed] [Google Scholar] 12. Patel P, Mulla H, Tanna S, Pandya H: Содействие фармакокинетическим исследованиям у детей: новое использование сухих пятен крови. Арка Дис Дитя 95: 484–487, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 13. Эрли А., Мискулин Д., Лэмб Э. Дж., Леви А. С., Улиг К.: Расчетные уравнения для скорости клубочковой фильтрации в эпоху стандартизации креатинина: систематический обзор. Энн Интерн Мед 156: 785–795, 2012 [PubMed] [Google Scholar] 14. Агарвал Р., Васавада Н., Чейз С.Д.: Жидкостная хроматография иоталамата в биологических образцах.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 785: 345–352, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 15. Agarwal R, Bills JE, Yigazu PM, Abraham T., Gizaw AB, Light RP, Bekele DM, Tegegne GG: Оценка клиренса йоталамата из плазмы: Продолжительность исследования влияет на качество СКФ. Clin J Am Soc Nephrol 4: 77–85, 2009 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Shah VP, Midha KK, Findlay JW, Hill HM, Hulse JD, McGilveray IJ, McKay G, Miller KJ, Patnaik RN, Powell ML, Tonelli A, Viswanathan CT, Yacobi A: валидация биоаналитического метода — пересмотр с десятилетним прогрессом .Pharm Res 17: 1551–1557, 2000 [PubMed] [Google Scholar]

Использование высушенных плазменных пятен для количественного определения йоталамата в клинических исследованиях

Clin J Am Soc Nephrol. 2013 7 июня; 8 (6): 909–914.

, ^* , ^† и ^*

Эндрю С. Хейган

^* Школа медицины Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

Дэвид Р. Джонс

^† Отдел клинической фармакологии Медицинского факультета Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Раджив Агарвал

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Ричард Л.Медицинский центр администрации ветеранов Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^† Отдел клинической фармакологии, Медицинский факультет, Школа медицины Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Доктор Раджив Агарвал, Медицинский центр Университета Индианы и ветеранов, 1481 West 10th Street, Индианаполис, IN 46202.Электронная почта: ude.iupui@lawragar

Получено 12 октября 2012 г .; Принято 11 января 2013 г.

© Американское общество нефрологов, 2013 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Резюме

Предпосылки и цели

Хотя зазоры иоталамата широко использовались для измерения СКФ, необходимость транспортировки образцов плазмы в охлажденных условиях исключает его использование в ситуациях нехватки ресурсов. Пятна крови или плазмы, высохшие на фильтровальной бумаге, могут стать решением.

Дизайн, условия, участники и измерения

Используя проверенную методику ВЭЖХ, измеряли иоталамат в сухих пятнах крови различных гематокритов. СКФ измеряли в течение 5 часов у 10 пациентов с ХБП с использованием пятен высушенной плазмы и стандартных методов.

Результаты

Снижение гематокрита привело к увеличению площади распространения крови и снижению выделения йоталамата из засохших пятен крови. Однако соотношение между концентрациями иоталамата в пятнах высушенной плазмы и плазмы показало наклон регрессии, равный 0.95 (95% доверительный интервал = 0,92–0,98, P <0,001). График Бланда-Альтмана для парных точек выборки ( n = 116) показал смещение -4 мкм г / мл и пределы согласия от -38 до +30 мкм г / мл. Взаимосвязь между СКФ при использовании пятен высушенной плазмы и методами плазмы также показала отличную взаимосвязь (наклон 0,95, 95% доверительный интервал = 0,82–1,17). График Бланда-Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл / мин. Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%.

Выводы

Хотя сухие пятна крови не подходят для исследований среди пациентов с очень низким гематокритом, пятна высушенной плазмы корректируют это ограничение, и это небольшое пилотное исследование показывает, что это достаточно надежный метод количественного определения йоталамата и последующего определения СКФ. .

Введение

СКФ необходимо определить для точной оценки функции почек и стадии ХБП. Золотым стандартом для измерения СКФ считается клиренс инулина, природного полисахарида, который не секретируется и не реабсорбируется почечными канальцами (1,2).Однако инулин дорог и его не хватает; поэтому были разработаны альтернативные методы измерения СКФ (3). Одним из таких методов является измерение клиренса иоталамата (IOT) после болюсной инъекции, что обеспечивает точное и точное определение СКФ (4). Определение клиренса ВГД с помощью традиционного анализа плазмы действительно имеет ограничения, включая необходимость венозной канюляции для отбора проб больших объемов крови, а также неотъемлемые затраты на хранение и транспортировку проб.

Возможным решением вышеуказанных ограничений является использование сухих пятен крови (DBS) на фильтровальной бумаге. Фильтровальная бумага использовалась для сбора, хранения и анализа крови человека с момента ее принятия доктором Робертом Гатри для обнаружения фенилаланина при диагностике фенилкетонурии у новорожденных в 1960-х годах (5). Последние достижения позволяют шире использовать DBS в клинических испытаниях для анализа ряда небольших молекул лекарств (6–10). К преимуществам DBS по сравнению с анализом плазмы можно отнести следующие.( 1 ) Меньший объем крови (<100 µ л) на образец делает матрицу применимой к педиатрическим или тяжелобольным пациентам, где больший объем крови может быть нежелательным. ( 2 ) Для отбора проб можно использовать уколы из пальца. Этот метод сбора крови легче выполнять персоналу, и пациенты предпочитают его, а не венозную канюлю. Менее инвазивный забор крови может улучшить набор и удержание участников исследования. ( 3 ) DBS можно транспортировать и хранить при температуре окружающей среды, что устраняет необходимость в дорогостоящих морозильных камерах и транспортировке с сухим льдом.( 4 ) Антимикробная природа бумаги не требует мер по обеспечению биологической опасности при транспортировке (11). У DBS есть свои ограничения, в первую очередь неопределенность влияния уровня гематокрита крови на результаты тестов.

Гематокрит может изменять вязкость крови и влиять на результаты количественного определения с использованием DBS (12). Например, образец крови с высоким гематокритом, вероятно, более вязкий по сравнению с образцом с более низким уровнем гематокрита и может меньше растекаться на фильтровальной бумаге.В свою очередь, это может изменить количество образца, полученного при отборе пуансона фиксированного диаметра из DBS. Решением этой досадной проблемы может быть использование пятна высушенной плазмы (DPS), вязкость которого не зависит от уровня гематокрита. Соответственно, мы предположили, что ( 1 ) гематокрит будет влиять на степень растекания на фильтровальной бумаге и, следовательно, концентрация IOT в плазме, ( 2 ) DPS будет корректировать эффект гематокрита, и ( 3 ) DPS обеспечит приемлемую корреляцию с эталонным методом определения СКФ.

Метод DPS был бы наиболее полезен в группах населения, где оценка СКФ на основе уравнений креатинина сыворотки не была адекватной, например, у пациентов с циррозом или саркопенией печени или у пациентов крайнего возраста. Уравнения креатинина сыворотки не являются оптимальными при сравнении людей из разных популяций или среди пациентов с минимальным нарушением функции почек (13). DPS может подойти в вышеупомянутых ситуациях.

Целью данного исследования является описание разработки и валидации метода количественной оценки ВГД в плазме человека, приготовленной в виде DPS, детектируемого с помощью ВЭЖХ-тандемного ультрафиолета (УФ).Метод был подтвержден путем сравнения измеренной СКФ с использованием традиционного анализа плазмы.

Материалы и методы

Химикаты, реагенты, оборудование, аппаратура ВЭЖХ-УФ и метод

Химикаты, реагенты, оборудование и аппаратура ВЭЖХ-УФ были созданы с использованием ранее опубликованного метода, используемого для анализа стандартов и образцов плазмы участников (14 ). Дополнительные химикаты, реагенты и оборудование следующие. Упакованные эритроциты человека и свежезамороженная плазма поставлялись через Центр Ричарда Л.Банк крови Медицинского центра Управления ветеранов Рудебуша (Индианаполис, Индиана). Карты FTA DMPK-A, FTA DMPK-B, FTA DMPK-C, Harris 6-мм Uni-Core и 903 Specimen Protein Saver Card были получены через GE Healthcare (Бакингемшир, Великобритания).

Подготовка образца DBS

Первоначальные эксперименты показали, что результаты хроматографии аналогичны для всех фильтровальных бумаг. Карточки сохранения протеина 903 были самыми дешевыми; поэтому все эксперименты проводились с использованием этой бумаги.Используя регулируемую микропипетку, 15 мкл мкл крови были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Карточкам давали высохнуть на открытом воздухе в течение 2 часов в вертикальном положении. Карты затем переносили в эксикатор, содержащий рыхлый сухой осушитель, для дополнительной сушки в течение ночи. Диск диаметром 6 мм пробивали из пятна в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл; 100 мкл мкл подвижной фазы (85% 50 мМ натрий-фосфатного буфера, 10% метанола, 5% ацетонитрила).Образцы встряхивали в течение 60 минут, а затем центрифугировали в течение 2 минут при 14000 об / мин. Полученный супернатант переносили в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и центрифугировали в течение 6 минут при 14000 об / мин. Затем супернатант переносили в чистый сосуд, закрывали крышкой и анализировали с помощью ВЭЖХ-УФ.

Подготовка образца DPS

С помощью регулируемой микропипетки 15 мкл мкл плазмы были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Остальная часть подготовки DPS соответствует контуру образцов DBS.

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Образцы крови с определенным уровнем гематокрита (21,2% или 33,5%) получали разбавлением эритроцитов свежезамороженной плазмой. Для каждого уровня гематокрита были сделаны шесть пятен DBS, были получены цифровые изображения DBS, и площадь пятна крови была определена с использованием формулы вычисления площади с использованием Photoshop Creative Suite 5 (Adobe Systems, Сан-Хосе, Калифорния). Полные стандартные кривые были построены для каждой концентрации гематокрита путем добавления IOT и нанесены пятнами.

DPS Коррекция эффекта гематокрита у людей

Были обнаружены образцы плазмы от 10 субъектов, содержащие диапазон гематокрита (27,9–44,8), взятые в 12 точках в течение 5 часов после болюсной инъекции ВГД. Концентрации сравнивали с образцами плазмы, не нанесенными на фильтровальную бумагу и приготовленными параллельно. График Бланда – Альтмана (разница средних) использовался для анализа соответствия между DPS и традиционными плазменными методами.

Популяция исследования

Популяция исследования состояла из 10 участников в возрасте от 41 до 82 лет со средним значением (± стандартное отклонение) 65.2 ± 13,4 года. Шесть участников были мужчинами. Пять участников были белыми, а пять — черными. Девять пациентов страдали анемией легкой степени, со средним уровнем гемоглобина 11,46 ± 1,32 г / дл и средним гематокритом 34,04 ± 4,19%. Средняя расчетная СКФ составила 33,4 ± 10,1 мл / мин на 1,73 м ² (диапазон = 18–55,9 мл / мин на 1,73 м ² ). Этиология ХБП заключалась в гипертоническом нефросклерозе у четырех участников, сахарном диабете у четырех участников и обструктивной уропатии у двух участников.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ.

Были построены фармакокинетические параметры между параллельными DPS и традиционными наборами образцов участников из плазмы ( n = 10).СКФ оценивали для каждого метода и сравнивали с использованием программного обеспечения WinNonlin (Сент-Луис, Миссури) и двухфармакокинетической модели, как описано ранее (15). Опять же, график Бланда-Альтмана использовался для проверки соответствия между двумя методами.

Валидация метода: меж- и внутридневная изменчивость

Точность и прецизионность метода определяли путем анализа повторений полных стандартных кривых в течение одного и того же цикла и в шести отдельных случаях в течение 60 дней. Были определены точность и прецизионность.Прецизионность определялась путем расчета коэффициента вариации (CV) в пределах 1 дня (внутридневная точность) и между днями (внутридневная точность). Точность определялась путем вычисления процента ошибки (наблюдаемое – прогнозируемое) × 100 / прогнозируемое.

Стандарт плазмы, приготовленный до концентрации, равной половине самой низкой точки кривой (25 µ г / мл), наносили на 903 карточки ( n = 14). Были рассчитаны площади для определения обнаруживаемости и точности. Протокол был одобрен Институциональным наблюдательным советом Университета Индианы по защите людей и Комитетом по исследованиям и развитию по делам ветеранов, и каждый субъект подписал письменное информированное согласие.

Результаты

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Площадь пятен цельной крови с гематокритом 33,5% была примерно на 10% меньше, чем пятна с гематокритом 22,2% (, вставка). Неудивительно, что стандартная кривая, построенная с гематокритом крови 22,2% и 33,5%, давала различные ответные реакции площади пиков ВГД (). Как и ожидалось, по сравнению с образцами с 22,2% средние наклоны площади IOT в зависимости от концентрации в образцах с гематокритом 33,5% были на 37% больше.

Сравнение стандартных кривых концентраций иоталамата с площадью пика, измеренной с помощью ВЭЖХ, показывает, что более низкий гематокрит вызывает более низкое извлечение иоталамата. На вставке показано, что площадь, занимаемая пятном равного объема крови, больше при более низком гематокрите.

DPS Коррекция гематокритного эффекта у людей

Отношение между концентрацией IOT участников в DPS и плазме было отличным (). Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95, который значительно отличался от 1. Таким образом, по сравнению со стандартным методом отбора проб IOT, метод DPS дал среднюю концентрацию в парных точках выборки, которая была на 5% ниже по сравнению с плазма.График Бланда – Альтмана парных точек выборки ( n = 116) показал смещение от -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл (, вставка). Поскольку распределение различий не было нормально распределенным, что привело к появлению мегафонного или V-образного графика, мы вычислили логарифмически преобразованные различия. Смещение составило 1,7% (95% доверительный интервал = -22,3%, 21,0%).

Показана взаимосвязь между концентрацией йоталамата у участников, полученной стандартным методом, и пятнами высушенной плазмы. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,92–0,98. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 116), который показывает смещение -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ

Связь между расчетной СКФ в DPS и плазменных методах была превосходной (). Хотя регрессия СКФ, оцененная двумя методами, показала наклон 0.95, он не отличался значительно от 1, потому что 95% доверительный интервал наклона включал 1. График Бланда – Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл. / мин (, Врезка).

Показана взаимосвязь между оценкой СКФ с использованием пятна высушенной плазмы и стандартным методом. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,82–1,07. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 10), который показывает смещение 2 мл / мин с пределами согласия от –6 до +10 мл / мин.

Парные концентрации ионов плазмы и DPS в зависимости от времени для каждого из 10 субъектов показаны в. Большинство измерений мало различались между методами, указанными количественно в.

Соответствие между методами показано в виде динамики кривых распада иоталамата за 300 минут для каждого из 10 субъектов. Каждая панель представляет один предмет; треугольники обозначают стандартный метод, а кружки обозначают метод DPS.

Точность и прецизионность теста – повторного тестирования

Результаты тестирования – повторного тестирования показаны на.Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%. Статистически значимые, но небольшие неточности наблюдались для самых высоких и самых низких концентраций IOT. Среднее значение CV и ошибка для каждой точки стандартной кривой находились в пределах принятых критериев валидации анализа (<15%) (15). Дневные наклоны имели CV 4,7%, тогда как дневные CV наклонов составляли 3,8%. Мы измерили площадь пика с номинальной концентрацией 25 µ мкг / мл IOT в плазме. В каждом случае четко распознавался пик IOT, и площадь пика имела CV 9.7%.

Таблица 1.

Точность и прецизионность повторных испытаний

5,3 (−16,5, 10,7)

Номинальная концентрация йоталамата ( µ г / мл)	Средняя концентрация ( µ г / мл)	SD	Эффективная точность (% коэффициента отклонения)	Точность (% ошибки, 95% доверительный интервал)
Проведение дневного диагностического теста
50	48	3	2,4 (-11,3, 1,3)
100	96	7	6,9	2,7 (-10,9, 3)
200	194	26
300	300	20	6,5	2,7 (−6,8, 7)
500	511	16	3,2	5.7)
1000	1052	53	5	2.2 (-0,3, 10,8)
Производительность дневного диагностического теста
50	55	4	7,9	100 9024	103	8	7,9	3,4 (-5,2, 12)
200	212	18	8,3	3,6 (-3,3, 15,2)	31241			27	8.8	3,7 (−5,9, 13,3)
500	511	21	4	1,7 (−2,1, 6,6)
1000	1067	43 9024 (2.2, 11.2)

Мы можем быть уверены, что IOT стабильно в фильтровальной бумаге в течение 60 дней. Мы подготовили образцы DPS в первый день и повторно использовали эти стандарты для измерения межсуточной изменчивости. Наибольшее время среди измерений IOT составило 60 дней.В это время было хорошее согласие в измерении тест-повторный тест, как показано на.

Обсуждение

Результаты наших экспериментов демонстрируют разработку и валидацию простого быстрого анализа для количественной оценки концентраций ВГД и последующего определения СКФ в образцах DPS человека с помощью ВЭЖХ-УФ, показывая приемлемую корреляцию с традиционной обработкой плазмы. Некоторые выводы заслуживают внимания и будут обсуждаться.

Изменение гематокрита между образцами соответствует наблюдаемому изменению размера пятна согласованных объемов (9.8%). Большее распространение образцов с более низким гематокритом вызывает большее распределение ВГД на фильтровальной бумаге. Как и ожидалось, пробойник фиксированного диаметра, взятый из пятен с разным уровнем гематокрита, эффективно отбирает разные объемы крови. Таким образом, из образцов с более низким гематокритом извлекается более низкая концентрация ВГД. Изменение площади пика IOT не соответствует линейно увеличению площади пятна и не может быть эффективно компенсировано в этом анализе. Это открытие является особенно важным ограничением DBS при использовании у людей с ХБП, у которых может быть аномально низкий уровень гематокрита.Хотя измерение клиренса ВГД для определения СКФ у участников с тяжелой анемией не является обычным делом, по сравнению с методом DBS, использование метода DPS может дать более надежные результаты, особенно среди лиц с тяжелой анемией.

Использование плазмы на фильтровальной бумаге устраняет вариабельность уровней гематокрита за счет более сложной подготовки проб. Использование DPS требует наличия центрифуги и пробирок для сбора крови для фракционирования цельной крови. Тем не менее, подготовка образцов по-прежнему проще, чем традиционный метод плазмы, устраняя необходимость в больших объемах с помощью венозной канюли, хранения и ограничений транспортировки образцов.DPS предоставил подходящую альтернативу плазме для количественного определения концентрации ВГД в плазме у участников с ХЗП.

Важным выводом нашего исследования было то, что, несмотря на большие различия в уровнях гематокрита среди участников, не наблюдалось значительных различий в расчетной концентрации ВГД между методами. Смещение в методе парной пробы плазмы по сравнению с методом DPS было низким, а точность для каждой парной временной точки между методами находилась в пределах 15%. Кроме того, рассчитанная СКФ у участников обеспечивает точность в пределах 15% между методами, показывая, что DPS является подходящей альтернативой плазме для оценки СКФ для оценки почечной гемодинамики и стадии ХБП.

Все процессы внутридневной и междневной валидации обеспечили точность и прецизионность в рамках принятых критериев валидации анализа и показали, что аналит стабилен в фильтровальной бумаге до 60 дней (16). Площади пиков образцов в плазме всего 25 µ г / мл можно было легко визуализировать, а надежность суточного теста-повторного тестирования для оценки площади пика составляла <10%.

Ограничения этого пилотного исследования включают небольшой размер выборки участников ( n = 10). Дополнительные эксперименты с участием более крупных образцов улучшили бы статистическую мощность тестов.Дополнительным ограничением является то, что используемый в настоящее время более низкий уровень гематокрита 22,2% при сравнении распространения мажущих кровянистых выделений находится на нижних границах того, что может быть обнаружено клинически. У стабильных пациентов с ХБП меньше шансов встретить широкий диапазон уровней гематокрита. Дополнительные эксперименты, включающие более узкие диапазоны уровней гематокрита, могут быть желательными для характеристики влияния гематокрита на восстановление DBS.

Будущие эксперименты, проведенные для преодоления эффекта гематокрита, могут расширить область применения DBS для включения участников с различным уровнем гематокрита.Обнаружение известного объема и взятие всего пятна для анализа свело бы на нет эффект распределения образца и обеспечило бы анализ фиксированного объема крови.

Таким образом, мы показываем, что DBS не подходят для исследований, в которых участвуют люди с аномальным уровнем гематокрита. Тем не менее, DPS корректируют это ограничение, и они являются надежным методом для количественной оценки IOT и последующего определения GFR. Текущий метод показывает приемлемую точность, прецизионность и надежность в соответствии с общепринятыми критериями валидации.Матрица DPS может позволить осуществлять выборку групп населения, которые ранее были ограничены (педиатрические или тяжелобольные или пациенты, проживающие в отдаленных районах) из-за необходимости меньшего объема крови, а также обеспечивать более простые и экономичные средства хранения и транспортировки образцов. .

Раскрытие информации

R.A. входит в состав руководящих комитетов исследований, финансируемых Roche, Amgen, Celgene и Reata, а также в бюро спикеров Merck и Abbott, а также является консультантом Daichii Sankyo, Inc., Takeda Pharma и Sigma Tau.

Благодарность

Исследование было частично поддержано Национальными институтами здравоохранения (грант 5 U01-DK071633-05).

Сноски

Публикуется в Интернете перед печатью. Дата публикации доступна на сайте www.cjasn.org.

Ссылки

2. Флорейн К.В., Барендрегт Дж. Н., Лентес Э. Г., ван Дам В., Проджосуджади В., ван Заас Дж. Л., ван Эс Л. А., Чанг П. С. Измерение скорости клубочковой фильтрации с помощью однократной инъекции инулина. Почка Int 46: 252–259, 1994 [PubMed] [Google Scholar] 3.Agarwal R: Амбулаторное измерение СКФ с холодным йоталаматом у взрослых с хроническим заболеванием почек. Am J Kidney Dis 41: 752–759, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 4. Доулинг Т.С., Фрай Р.Ф., Фрейли Д.С., Мацке Г.Р.: Сравнение методов очистки от йоталамата для измерения СКФ. Фармакотерапия 19: 943–950, 1999 [PubMed] [Google Scholar] 5. Гатри Р., Сьюзи А.: Простой метод фенилаланина для обнаружения фенилкетонурии в больших популяциях новорожденных. Педиатрия 32: 338–343, 1963 [PubMed] [Google Scholar] 6.Мей Дж. В., Александр Дж. Р., Адам Б. В., Хэннон В. Х .: Использование фильтровальной бумаги для сбора и анализа образцов цельной крови человека. J Nutr 131: 1631S – 1636S, 2001 [PubMed] [Google Scholar] 7. Li W, Tse FL: отбор проб высушенной крови в сочетании с ЖХ-МС / МС для количественного анализа малых молекул. Биомедицинский хроматограф 24: 49–65, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 8. Нельсон К. Б., Дамброзия Дж. М., Гретер Дж. К., Филлипс Т. М.: Неонатальные цитокины и факторы свертывания крови у детей с церебральным параличом. Энн Нейрол 44: 665–675, 1998 [PubMed] [Google Scholar] 9.Патчен Л.С., Маунт Д.Л., Шварц И.К., Черчилль Ф.К .: Анализ образцов крови, абсорбированных фильтровальной бумагой, на содержание хлорохина и его основного метаболита с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием. J Хроматограф A 278: 81–89, 1983 [PubMed] [Google Scholar] 10. Спунер Н., Лад Р., Барфилд М.: Высушенные пятна крови как метод сбора образцов для определения фармакокинетики в клинических исследованиях: Соображения по валидации количественного биоаналитического метода.Анальный хим 81: 1557–1563, 2009 [PubMed] [Google Scholar] 12. Patel P, Mulla H, Tanna S, Pandya H: Содействие фармакокинетическим исследованиям у детей: новое использование сухих пятен крови. Арка Дис Дитя 95: 484–487, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 13. Эрли А., Мискулин Д., Лэмб Э. Дж., Леви А. С., Улиг К.: Расчетные уравнения для скорости клубочковой фильтрации в эпоху стандартизации креатинина: систематический обзор. Энн Интерн Мед 156: 785–795, 2012 [PubMed] [Google Scholar] 14. Агарвал Р., Васавада Н., Чейз С.Д.: Жидкостная хроматография иоталамата в биологических образцах.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 785: 345–352, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 15. Agarwal R, Bills JE, Yigazu PM, Abraham T., Gizaw AB, Light RP, Bekele DM, Tegegne GG: Оценка клиренса йоталамата из плазмы: Продолжительность исследования влияет на качество СКФ. Clin J Am Soc Nephrol 4: 77–85, 2009 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Shah VP, Midha KK, Findlay JW, Hill HM, Hulse JD, McGilveray IJ, McKay G, Miller KJ, Patnaik RN, Powell ML, Tonelli A, Viswanathan CT, Yacobi A: валидация биоаналитического метода — пересмотр с десятилетним прогрессом .Pharm Res 17: 1551–1557, 2000 [PubMed] [Google Scholar]

Использование высушенных плазменных пятен для количественного определения йоталамата в клинических исследованиях

Clin J Am Soc Nephrol. 2013 7 июня; 8 (6): 909–914.

, ^* , ^† и ^*

Эндрю С. Хейган

^* Школа медицины Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

Дэвид Р. Джонс

^† Отдел клинической фармакологии Медицинского факультета Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Раджив Агарвал

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Ричард Л.Медицинский центр администрации ветеранов Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^† Отдел клинической фармакологии, Медицинский факультет, Школа медицины Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Доктор Раджив Агарвал, Медицинский центр Университета Индианы и ветеранов, 1481 West 10th Street, Индианаполис, IN 46202.Электронная почта: ude.iupui@lawragar

Получено 12 октября 2012 г .; Принято 11 января 2013 г.

© Американское общество нефрологов, 2013 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Резюме

Предпосылки и цели

Хотя зазоры иоталамата широко использовались для измерения СКФ, необходимость транспортировки образцов плазмы в охлажденных условиях исключает его использование в ситуациях нехватки ресурсов. Пятна крови или плазмы, высохшие на фильтровальной бумаге, могут стать решением.

Дизайн, условия, участники и измерения

Используя проверенную методику ВЭЖХ, измеряли иоталамат в сухих пятнах крови различных гематокритов. СКФ измеряли в течение 5 часов у 10 пациентов с ХБП с использованием пятен высушенной плазмы и стандартных методов.

Результаты

Снижение гематокрита привело к увеличению площади распространения крови и снижению выделения йоталамата из засохших пятен крови. Однако соотношение между концентрациями иоталамата в пятнах высушенной плазмы и плазмы показало наклон регрессии, равный 0.95 (95% доверительный интервал = 0,92–0,98, P <0,001). График Бланда-Альтмана для парных точек выборки ( n = 116) показал смещение -4 мкм г / мл и пределы согласия от -38 до +30 мкм г / мл. Взаимосвязь между СКФ при использовании пятен высушенной плазмы и методами плазмы также показала отличную взаимосвязь (наклон 0,95, 95% доверительный интервал = 0,82–1,17). График Бланда-Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл / мин. Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%.

Выводы

Хотя сухие пятна крови не подходят для исследований среди пациентов с очень низким гематокритом, пятна высушенной плазмы корректируют это ограничение, и это небольшое пилотное исследование показывает, что это достаточно надежный метод количественного определения йоталамата и последующего определения СКФ. .

Введение

СКФ необходимо определить для точной оценки функции почек и стадии ХБП. Золотым стандартом для измерения СКФ считается клиренс инулина, природного полисахарида, который не секретируется и не реабсорбируется почечными канальцами (1,2).Однако инулин дорог и его не хватает; поэтому были разработаны альтернативные методы измерения СКФ (3). Одним из таких методов является измерение клиренса иоталамата (IOT) после болюсной инъекции, что обеспечивает точное и точное определение СКФ (4). Определение клиренса ВГД с помощью традиционного анализа плазмы действительно имеет ограничения, включая необходимость венозной канюляции для отбора проб больших объемов крови, а также неотъемлемые затраты на хранение и транспортировку проб.

Возможным решением вышеуказанных ограничений является использование сухих пятен крови (DBS) на фильтровальной бумаге. Фильтровальная бумага использовалась для сбора, хранения и анализа крови человека с момента ее принятия доктором Робертом Гатри для обнаружения фенилаланина при диагностике фенилкетонурии у новорожденных в 1960-х годах (5). Последние достижения позволяют шире использовать DBS в клинических испытаниях для анализа ряда небольших молекул лекарств (6–10). К преимуществам DBS по сравнению с анализом плазмы можно отнести следующие.( 1 ) Меньший объем крови (<100 µ л) на образец делает матрицу применимой к педиатрическим или тяжелобольным пациентам, где больший объем крови может быть нежелательным. ( 2 ) Для отбора проб можно использовать уколы из пальца. Этот метод сбора крови легче выполнять персоналу, и пациенты предпочитают его, а не венозную канюлю. Менее инвазивный забор крови может улучшить набор и удержание участников исследования. ( 3 ) DBS можно транспортировать и хранить при температуре окружающей среды, что устраняет необходимость в дорогостоящих морозильных камерах и транспортировке с сухим льдом.( 4 ) Антимикробная природа бумаги не требует мер по обеспечению биологической опасности при транспортировке (11). У DBS есть свои ограничения, в первую очередь неопределенность влияния уровня гематокрита крови на результаты тестов.

Гематокрит может изменять вязкость крови и влиять на результаты количественного определения с использованием DBS (12). Например, образец крови с высоким гематокритом, вероятно, более вязкий по сравнению с образцом с более низким уровнем гематокрита и может меньше растекаться на фильтровальной бумаге.В свою очередь, это может изменить количество образца, полученного при отборе пуансона фиксированного диаметра из DBS. Решением этой досадной проблемы может быть использование пятна высушенной плазмы (DPS), вязкость которого не зависит от уровня гематокрита. Соответственно, мы предположили, что ( 1 ) гематокрит будет влиять на степень растекания на фильтровальной бумаге и, следовательно, концентрация IOT в плазме, ( 2 ) DPS будет корректировать эффект гематокрита, и ( 3 ) DPS обеспечит приемлемую корреляцию с эталонным методом определения СКФ.

Метод DPS был бы наиболее полезен в группах населения, где оценка СКФ на основе уравнений креатинина сыворотки не была адекватной, например, у пациентов с циррозом или саркопенией печени или у пациентов крайнего возраста. Уравнения креатинина сыворотки не являются оптимальными при сравнении людей из разных популяций или среди пациентов с минимальным нарушением функции почек (13). DPS может подойти в вышеупомянутых ситуациях.

Целью данного исследования является описание разработки и валидации метода количественной оценки ВГД в плазме человека, приготовленной в виде DPS, детектируемого с помощью ВЭЖХ-тандемного ультрафиолета (УФ).Метод был подтвержден путем сравнения измеренной СКФ с использованием традиционного анализа плазмы.

Материалы и методы

Химикаты, реагенты, оборудование, аппаратура ВЭЖХ-УФ и метод

Химикаты, реагенты, оборудование и аппаратура ВЭЖХ-УФ были созданы с использованием ранее опубликованного метода, используемого для анализа стандартов и образцов плазмы участников (14 ). Дополнительные химикаты, реагенты и оборудование следующие. Упакованные эритроциты человека и свежезамороженная плазма поставлялись через Центр Ричарда Л.Банк крови Медицинского центра Управления ветеранов Рудебуша (Индианаполис, Индиана). Карты FTA DMPK-A, FTA DMPK-B, FTA DMPK-C, Harris 6-мм Uni-Core и 903 Specimen Protein Saver Card были получены через GE Healthcare (Бакингемшир, Великобритания).

Подготовка образца DBS

Первоначальные эксперименты показали, что результаты хроматографии аналогичны для всех фильтровальных бумаг. Карточки сохранения протеина 903 были самыми дешевыми; поэтому все эксперименты проводились с использованием этой бумаги.Используя регулируемую микропипетку, 15 мкл мкл крови были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Карточкам давали высохнуть на открытом воздухе в течение 2 часов в вертикальном положении. Карты затем переносили в эксикатор, содержащий рыхлый сухой осушитель, для дополнительной сушки в течение ночи. Диск диаметром 6 мм пробивали из пятна в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл; 100 мкл мкл подвижной фазы (85% 50 мМ натрий-фосфатного буфера, 10% метанола, 5% ацетонитрила).Образцы встряхивали в течение 60 минут, а затем центрифугировали в течение 2 минут при 14000 об / мин. Полученный супернатант переносили в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и центрифугировали в течение 6 минут при 14000 об / мин. Затем супернатант переносили в чистый сосуд, закрывали крышкой и анализировали с помощью ВЭЖХ-УФ.

Подготовка образца DPS

С помощью регулируемой микропипетки 15 мкл мкл плазмы были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Остальная часть подготовки DPS соответствует контуру образцов DBS.

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Образцы крови с определенным уровнем гематокрита (21,2% или 33,5%) получали разбавлением эритроцитов свежезамороженной плазмой. Для каждого уровня гематокрита были сделаны шесть пятен DBS, были получены цифровые изображения DBS, и площадь пятна крови была определена с использованием формулы вычисления площади с использованием Photoshop Creative Suite 5 (Adobe Systems, Сан-Хосе, Калифорния). Полные стандартные кривые были построены для каждой концентрации гематокрита путем добавления IOT и нанесены пятнами.

DPS Коррекция эффекта гематокрита у людей

Были обнаружены образцы плазмы от 10 субъектов, содержащие диапазон гематокрита (27,9–44,8), взятые в 12 точках в течение 5 часов после болюсной инъекции ВГД. Концентрации сравнивали с образцами плазмы, не нанесенными на фильтровальную бумагу и приготовленными параллельно. График Бланда – Альтмана (разница средних) использовался для анализа соответствия между DPS и традиционными плазменными методами.

Популяция исследования

Популяция исследования состояла из 10 участников в возрасте от 41 до 82 лет со средним значением (± стандартное отклонение) 65.2 ± 13,4 года. Шесть участников были мужчинами. Пять участников были белыми, а пять — черными. Девять пациентов страдали анемией легкой степени, со средним уровнем гемоглобина 11,46 ± 1,32 г / дл и средним гематокритом 34,04 ± 4,19%. Средняя расчетная СКФ составила 33,4 ± 10,1 мл / мин на 1,73 м ² (диапазон = 18–55,9 мл / мин на 1,73 м ² ). Этиология ХБП заключалась в гипертоническом нефросклерозе у четырех участников, сахарном диабете у четырех участников и обструктивной уропатии у двух участников.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ.

Были построены фармакокинетические параметры между параллельными DPS и традиционными наборами образцов участников из плазмы ( n = 10).СКФ оценивали для каждого метода и сравнивали с использованием программного обеспечения WinNonlin (Сент-Луис, Миссури) и двухфармакокинетической модели, как описано ранее (15). Опять же, график Бланда-Альтмана использовался для проверки соответствия между двумя методами.

Валидация метода: меж- и внутридневная изменчивость

Точность и прецизионность метода определяли путем анализа повторений полных стандартных кривых в течение одного и того же цикла и в шести отдельных случаях в течение 60 дней. Были определены точность и прецизионность.Прецизионность определялась путем расчета коэффициента вариации (CV) в пределах 1 дня (внутридневная точность) и между днями (внутридневная точность). Точность определялась путем вычисления процента ошибки (наблюдаемое – прогнозируемое) × 100 / прогнозируемое.

Стандарт плазмы, приготовленный до концентрации, равной половине самой низкой точки кривой (25 µ г / мл), наносили на 903 карточки ( n = 14). Были рассчитаны площади для определения обнаруживаемости и точности. Протокол был одобрен Институциональным наблюдательным советом Университета Индианы по защите людей и Комитетом по исследованиям и развитию по делам ветеранов, и каждый субъект подписал письменное информированное согласие.

Результаты

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Площадь пятен цельной крови с гематокритом 33,5% была примерно на 10% меньше, чем пятна с гематокритом 22,2% (, вставка). Неудивительно, что стандартная кривая, построенная с гематокритом крови 22,2% и 33,5%, давала различные ответные реакции площади пиков ВГД (). Как и ожидалось, по сравнению с образцами с 22,2% средние наклоны площади IOT в зависимости от концентрации в образцах с гематокритом 33,5% были на 37% больше.

Сравнение стандартных кривых концентраций иоталамата с площадью пика, измеренной с помощью ВЭЖХ, показывает, что более низкий гематокрит вызывает более низкое извлечение иоталамата. На вставке показано, что площадь, занимаемая пятном равного объема крови, больше при более низком гематокрите.

DPS Коррекция гематокритного эффекта у людей

Отношение между концентрацией IOT участников в DPS и плазме было отличным (). Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95, который значительно отличался от 1. Таким образом, по сравнению со стандартным методом отбора проб IOT, метод DPS дал среднюю концентрацию в парных точках выборки, которая была на 5% ниже по сравнению с плазма.График Бланда – Альтмана парных точек выборки ( n = 116) показал смещение от -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл (, вставка). Поскольку распределение различий не было нормально распределенным, что привело к появлению мегафонного или V-образного графика, мы вычислили логарифмически преобразованные различия. Смещение составило 1,7% (95% доверительный интервал = -22,3%, 21,0%).

Показана взаимосвязь между концентрацией йоталамата у участников, полученной стандартным методом, и пятнами высушенной плазмы. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,92–0,98. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 116), который показывает смещение -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ

Связь между расчетной СКФ в DPS и плазменных методах была превосходной (). Хотя регрессия СКФ, оцененная двумя методами, показала наклон 0.95, он не отличался значительно от 1, потому что 95% доверительный интервал наклона включал 1. График Бланда – Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл. / мин (, Врезка).

Показана взаимосвязь между оценкой СКФ с использованием пятна высушенной плазмы и стандартным методом. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,82–1,07. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 10), который показывает смещение 2 мл / мин с пределами согласия от –6 до +10 мл / мин.

Парные концентрации ионов плазмы и DPS в зависимости от времени для каждого из 10 субъектов показаны в. Большинство измерений мало различались между методами, указанными количественно в.

Соответствие между методами показано в виде динамики кривых распада иоталамата за 300 минут для каждого из 10 субъектов. Каждая панель представляет один предмет; треугольники обозначают стандартный метод, а кружки обозначают метод DPS.

Точность и прецизионность теста – повторного тестирования

Результаты тестирования – повторного тестирования показаны на.Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%. Статистически значимые, но небольшие неточности наблюдались для самых высоких и самых низких концентраций IOT. Среднее значение CV и ошибка для каждой точки стандартной кривой находились в пределах принятых критериев валидации анализа (<15%) (15). Дневные наклоны имели CV 4,7%, тогда как дневные CV наклонов составляли 3,8%. Мы измерили площадь пика с номинальной концентрацией 25 µ мкг / мл IOT в плазме. В каждом случае четко распознавался пик IOT, и площадь пика имела CV 9.7%.

Таблица 1.

Точность и прецизионность повторных испытаний

5,3 (−16,5, 10,7)

Номинальная концентрация йоталамата ( µ г / мл)	Средняя концентрация ( µ г / мл)	SD	Эффективная точность (% коэффициента отклонения)	Точность (% ошибки, 95% доверительный интервал)
Проведение дневного диагностического теста
50	48	3	2,4 (-11,3, 1,3)
100	96	7	6,9	2,7 (-10,9, 3)
200	194	26
300	300	20	6,5	2,7 (−6,8, 7)
500	511	16	3,2	5.7)
1000	1052	53	5	2.2 (-0,3, 10,8)
Производительность дневного диагностического теста
50	55	4	7,9	100 9024	103	8	7,9	3,4 (-5,2, 12)
200	212	18	8,3	3,6 (-3,3, 15,2)	31241			27	8.8	3,7 (−5,9, 13,3)
500	511	21	4	1,7 (−2,1, 6,6)
1000	1067	43 9024 (2.2, 11.2)

Мы можем быть уверены, что IOT стабильно в фильтровальной бумаге в течение 60 дней. Мы подготовили образцы DPS в первый день и повторно использовали эти стандарты для измерения межсуточной изменчивости. Наибольшее время среди измерений IOT составило 60 дней.В это время было хорошее согласие в измерении тест-повторный тест, как показано на.

Обсуждение

Результаты наших экспериментов демонстрируют разработку и валидацию простого быстрого анализа для количественной оценки концентраций ВГД и последующего определения СКФ в образцах DPS человека с помощью ВЭЖХ-УФ, показывая приемлемую корреляцию с традиционной обработкой плазмы. Некоторые выводы заслуживают внимания и будут обсуждаться.

Изменение гематокрита между образцами соответствует наблюдаемому изменению размера пятна согласованных объемов (9.8%). Большее распространение образцов с более низким гематокритом вызывает большее распределение ВГД на фильтровальной бумаге. Как и ожидалось, пробойник фиксированного диаметра, взятый из пятен с разным уровнем гематокрита, эффективно отбирает разные объемы крови. Таким образом, из образцов с более низким гематокритом извлекается более низкая концентрация ВГД. Изменение площади пика IOT не соответствует линейно увеличению площади пятна и не может быть эффективно компенсировано в этом анализе. Это открытие является особенно важным ограничением DBS при использовании у людей с ХБП, у которых может быть аномально низкий уровень гематокрита.Хотя измерение клиренса ВГД для определения СКФ у участников с тяжелой анемией не является обычным делом, по сравнению с методом DBS, использование метода DPS может дать более надежные результаты, особенно среди лиц с тяжелой анемией.

Использование плазмы на фильтровальной бумаге устраняет вариабельность уровней гематокрита за счет более сложной подготовки проб. Использование DPS требует наличия центрифуги и пробирок для сбора крови для фракционирования цельной крови. Тем не менее, подготовка образцов по-прежнему проще, чем традиционный метод плазмы, устраняя необходимость в больших объемах с помощью венозной канюли, хранения и ограничений транспортировки образцов.DPS предоставил подходящую альтернативу плазме для количественного определения концентрации ВГД в плазме у участников с ХЗП.

Важным выводом нашего исследования было то, что, несмотря на большие различия в уровнях гематокрита среди участников, не наблюдалось значительных различий в расчетной концентрации ВГД между методами. Смещение в методе парной пробы плазмы по сравнению с методом DPS было низким, а точность для каждой парной временной точки между методами находилась в пределах 15%. Кроме того, рассчитанная СКФ у участников обеспечивает точность в пределах 15% между методами, показывая, что DPS является подходящей альтернативой плазме для оценки СКФ для оценки почечной гемодинамики и стадии ХБП.

Все процессы внутридневной и междневной валидации обеспечили точность и прецизионность в рамках принятых критериев валидации анализа и показали, что аналит стабилен в фильтровальной бумаге до 60 дней (16). Площади пиков образцов в плазме всего 25 µ г / мл можно было легко визуализировать, а надежность суточного теста-повторного тестирования для оценки площади пика составляла <10%.

Ограничения этого пилотного исследования включают небольшой размер выборки участников ( n = 10). Дополнительные эксперименты с участием более крупных образцов улучшили бы статистическую мощность тестов.Дополнительным ограничением является то, что используемый в настоящее время более низкий уровень гематокрита 22,2% при сравнении распространения мажущих кровянистых выделений находится на нижних границах того, что может быть обнаружено клинически. У стабильных пациентов с ХБП меньше шансов встретить широкий диапазон уровней гематокрита. Дополнительные эксперименты, включающие более узкие диапазоны уровней гематокрита, могут быть желательными для характеристики влияния гематокрита на восстановление DBS.

Будущие эксперименты, проведенные для преодоления эффекта гематокрита, могут расширить область применения DBS для включения участников с различным уровнем гематокрита.Обнаружение известного объема и взятие всего пятна для анализа свело бы на нет эффект распределения образца и обеспечило бы анализ фиксированного объема крови.

Таким образом, мы показываем, что DBS не подходят для исследований, в которых участвуют люди с аномальным уровнем гематокрита. Тем не менее, DPS корректируют это ограничение, и они являются надежным методом для количественной оценки IOT и последующего определения GFR. Текущий метод показывает приемлемую точность, прецизионность и надежность в соответствии с общепринятыми критериями валидации.Матрица DPS может позволить осуществлять выборку групп населения, которые ранее были ограничены (педиатрические или тяжелобольные или пациенты, проживающие в отдаленных районах) из-за необходимости меньшего объема крови, а также обеспечивать более простые и экономичные средства хранения и транспортировки образцов. .

Раскрытие информации

R.A. входит в состав руководящих комитетов исследований, финансируемых Roche, Amgen, Celgene и Reata, а также в бюро спикеров Merck и Abbott, а также является консультантом Daichii Sankyo, Inc., Takeda Pharma и Sigma Tau.

Благодарность

Исследование было частично поддержано Национальными институтами здравоохранения (грант 5 U01-DK071633-05).

Сноски

Публикуется в Интернете перед печатью. Дата публикации доступна на сайте www.cjasn.org.

Ссылки

2. Флорейн К.В., Барендрегт Дж. Н., Лентес Э. Г., ван Дам В., Проджосуджади В., ван Заас Дж. Л., ван Эс Л. А., Чанг П. С. Измерение скорости клубочковой фильтрации с помощью однократной инъекции инулина. Почка Int 46: 252–259, 1994 [PubMed] [Google Scholar] 3.Agarwal R: Амбулаторное измерение СКФ с холодным йоталаматом у взрослых с хроническим заболеванием почек. Am J Kidney Dis 41: 752–759, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 4. Доулинг Т.С., Фрай Р.Ф., Фрейли Д.С., Мацке Г.Р.: Сравнение методов очистки от йоталамата для измерения СКФ. Фармакотерапия 19: 943–950, 1999 [PubMed] [Google Scholar] 5. Гатри Р., Сьюзи А.: Простой метод фенилаланина для обнаружения фенилкетонурии в больших популяциях новорожденных. Педиатрия 32: 338–343, 1963 [PubMed] [Google Scholar] 6.Мей Дж. В., Александр Дж. Р., Адам Б. В., Хэннон В. Х .: Использование фильтровальной бумаги для сбора и анализа образцов цельной крови человека. J Nutr 131: 1631S – 1636S, 2001 [PubMed] [Google Scholar] 7. Li W, Tse FL: отбор проб высушенной крови в сочетании с ЖХ-МС / МС для количественного анализа малых молекул. Биомедицинский хроматограф 24: 49–65, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 8. Нельсон К. Б., Дамброзия Дж. М., Гретер Дж. К., Филлипс Т. М.: Неонатальные цитокины и факторы свертывания крови у детей с церебральным параличом. Энн Нейрол 44: 665–675, 1998 [PubMed] [Google Scholar] 9.Патчен Л.С., Маунт Д.Л., Шварц И.К., Черчилль Ф.К .: Анализ образцов крови, абсорбированных фильтровальной бумагой, на содержание хлорохина и его основного метаболита с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием. J Хроматограф A 278: 81–89, 1983 [PubMed] [Google Scholar] 10. Спунер Н., Лад Р., Барфилд М.: Высушенные пятна крови как метод сбора образцов для определения фармакокинетики в клинических исследованиях: Соображения по валидации количественного биоаналитического метода.Анальный хим 81: 1557–1563, 2009 [PubMed] [Google Scholar] 12. Patel P, Mulla H, Tanna S, Pandya H: Содействие фармакокинетическим исследованиям у детей: новое использование сухих пятен крови. Арка Дис Дитя 95: 484–487, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 13. Эрли А., Мискулин Д., Лэмб Э. Дж., Леви А. С., Улиг К.: Расчетные уравнения для скорости клубочковой фильтрации в эпоху стандартизации креатинина: систематический обзор. Энн Интерн Мед 156: 785–795, 2012 [PubMed] [Google Scholar] 14. Агарвал Р., Васавада Н., Чейз С.Д.: Жидкостная хроматография иоталамата в биологических образцах.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 785: 345–352, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 15. Agarwal R, Bills JE, Yigazu PM, Abraham T., Gizaw AB, Light RP, Bekele DM, Tegegne GG: Оценка клиренса йоталамата из плазмы: Продолжительность исследования влияет на качество СКФ. Clin J Am Soc Nephrol 4: 77–85, 2009 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Shah VP, Midha KK, Findlay JW, Hill HM, Hulse JD, McGilveray IJ, McKay G, Miller KJ, Patnaik RN, Powell ML, Tonelli A, Viswanathan CT, Yacobi A: валидация биоаналитического метода — пересмотр с десятилетним прогрессом .Pharm Res 17: 1551–1557, 2000 [PubMed] [Google Scholar]

Использование высушенных плазменных пятен для количественного определения йоталамата в клинических исследованиях

Clin J Am Soc Nephrol. 2013 7 июня; 8 (6): 909–914.

, ^* , ^† и ^*

Эндрю С. Хейган

^* Школа медицины Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

Дэвид Р. Джонс

^† Отдел клинической фармакологии Медицинского факультета Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Раджив Агарвал

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Ричард Л.Медицинский центр администрации ветеранов Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^* Медицинский факультет Университета Индианы и Медицинский центр администрации ветеранов Ричарда Л. Рудебуша, Индианаполис, Индиана; и

^† Отдел клинической фармакологии, Медицинский факультет, Школа медицины Университета Индианы, Индианаполис, Индиана

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Доктор Раджив Агарвал, Медицинский центр Университета Индианы и ветеранов, 1481 West 10th Street, Индианаполис, IN 46202.Электронная почта: ude.iupui@lawragar

Получено 12 октября 2012 г .; Принято 11 января 2013 г.

© Американское общество нефрологов, 2013 г. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Резюме

Предпосылки и цели

Хотя зазоры иоталамата широко использовались для измерения СКФ, необходимость транспортировки образцов плазмы в охлажденных условиях исключает его использование в ситуациях нехватки ресурсов. Пятна крови или плазмы, высохшие на фильтровальной бумаге, могут стать решением.

Дизайн, условия, участники и измерения

Используя проверенную методику ВЭЖХ, измеряли иоталамат в сухих пятнах крови различных гематокритов. СКФ измеряли в течение 5 часов у 10 пациентов с ХБП с использованием пятен высушенной плазмы и стандартных методов.

Результаты

Снижение гематокрита привело к увеличению площади распространения крови и снижению выделения йоталамата из засохших пятен крови. Однако соотношение между концентрациями иоталамата в пятнах высушенной плазмы и плазмы показало наклон регрессии, равный 0.95 (95% доверительный интервал = 0,92–0,98, P <0,001). График Бланда-Альтмана для парных точек выборки ( n = 116) показал смещение -4 мкм г / мл и пределы согласия от -38 до +30 мкм г / мл. Взаимосвязь между СКФ при использовании пятен высушенной плазмы и методами плазмы также показала отличную взаимосвязь (наклон 0,95, 95% доверительный интервал = 0,82–1,17). График Бланда-Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл / мин. Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%.

Выводы

Хотя сухие пятна крови не подходят для исследований среди пациентов с очень низким гематокритом, пятна высушенной плазмы корректируют это ограничение, и это небольшое пилотное исследование показывает, что это достаточно надежный метод количественного определения йоталамата и последующего определения СКФ. .

Введение

СКФ необходимо определить для точной оценки функции почек и стадии ХБП. Золотым стандартом для измерения СКФ считается клиренс инулина, природного полисахарида, который не секретируется и не реабсорбируется почечными канальцами (1,2).Однако инулин дорог и его не хватает; поэтому были разработаны альтернативные методы измерения СКФ (3). Одним из таких методов является измерение клиренса иоталамата (IOT) после болюсной инъекции, что обеспечивает точное и точное определение СКФ (4). Определение клиренса ВГД с помощью традиционного анализа плазмы действительно имеет ограничения, включая необходимость венозной канюляции для отбора проб больших объемов крови, а также неотъемлемые затраты на хранение и транспортировку проб.

Возможным решением вышеуказанных ограничений является использование сухих пятен крови (DBS) на фильтровальной бумаге. Фильтровальная бумага использовалась для сбора, хранения и анализа крови человека с момента ее принятия доктором Робертом Гатри для обнаружения фенилаланина при диагностике фенилкетонурии у новорожденных в 1960-х годах (5). Последние достижения позволяют шире использовать DBS в клинических испытаниях для анализа ряда небольших молекул лекарств (6–10). К преимуществам DBS по сравнению с анализом плазмы можно отнести следующие.( 1 ) Меньший объем крови (<100 µ л) на образец делает матрицу применимой к педиатрическим или тяжелобольным пациентам, где больший объем крови может быть нежелательным. ( 2 ) Для отбора проб можно использовать уколы из пальца. Этот метод сбора крови легче выполнять персоналу, и пациенты предпочитают его, а не венозную канюлю. Менее инвазивный забор крови может улучшить набор и удержание участников исследования. ( 3 ) DBS можно транспортировать и хранить при температуре окружающей среды, что устраняет необходимость в дорогостоящих морозильных камерах и транспортировке с сухим льдом.( 4 ) Антимикробная природа бумаги не требует мер по обеспечению биологической опасности при транспортировке (11). У DBS есть свои ограничения, в первую очередь неопределенность влияния уровня гематокрита крови на результаты тестов.

Гематокрит может изменять вязкость крови и влиять на результаты количественного определения с использованием DBS (12). Например, образец крови с высоким гематокритом, вероятно, более вязкий по сравнению с образцом с более низким уровнем гематокрита и может меньше растекаться на фильтровальной бумаге.В свою очередь, это может изменить количество образца, полученного при отборе пуансона фиксированного диаметра из DBS. Решением этой досадной проблемы может быть использование пятна высушенной плазмы (DPS), вязкость которого не зависит от уровня гематокрита. Соответственно, мы предположили, что ( 1 ) гематокрит будет влиять на степень растекания на фильтровальной бумаге и, следовательно, концентрация IOT в плазме, ( 2 ) DPS будет корректировать эффект гематокрита, и ( 3 ) DPS обеспечит приемлемую корреляцию с эталонным методом определения СКФ.

Метод DPS был бы наиболее полезен в группах населения, где оценка СКФ на основе уравнений креатинина сыворотки не была адекватной, например, у пациентов с циррозом или саркопенией печени или у пациентов крайнего возраста. Уравнения креатинина сыворотки не являются оптимальными при сравнении людей из разных популяций или среди пациентов с минимальным нарушением функции почек (13). DPS может подойти в вышеупомянутых ситуациях.

Целью данного исследования является описание разработки и валидации метода количественной оценки ВГД в плазме человека, приготовленной в виде DPS, детектируемого с помощью ВЭЖХ-тандемного ультрафиолета (УФ).Метод был подтвержден путем сравнения измеренной СКФ с использованием традиционного анализа плазмы.

Материалы и методы

Химикаты, реагенты, оборудование, аппаратура ВЭЖХ-УФ и метод

Химикаты, реагенты, оборудование и аппаратура ВЭЖХ-УФ были созданы с использованием ранее опубликованного метода, используемого для анализа стандартов и образцов плазмы участников (14 ). Дополнительные химикаты, реагенты и оборудование следующие. Упакованные эритроциты человека и свежезамороженная плазма поставлялись через Центр Ричарда Л.Банк крови Медицинского центра Управления ветеранов Рудебуша (Индианаполис, Индиана). Карты FTA DMPK-A, FTA DMPK-B, FTA DMPK-C, Harris 6-мм Uni-Core и 903 Specimen Protein Saver Card были получены через GE Healthcare (Бакингемшир, Великобритания).

Подготовка образца DBS

Первоначальные эксперименты показали, что результаты хроматографии аналогичны для всех фильтровальных бумаг. Карточки сохранения протеина 903 были самыми дешевыми; поэтому все эксперименты проводились с использованием этой бумаги.Используя регулируемую микропипетку, 15 мкл мкл крови были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Карточкам давали высохнуть на открытом воздухе в течение 2 часов в вертикальном положении. Карты затем переносили в эксикатор, содержащий рыхлый сухой осушитель, для дополнительной сушки в течение ночи. Диск диаметром 6 мм пробивали из пятна в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл; 100 мкл мкл подвижной фазы (85% 50 мМ натрий-фосфатного буфера, 10% метанола, 5% ацетонитрила).Образцы встряхивали в течение 60 минут, а затем центрифугировали в течение 2 минут при 14000 об / мин. Полученный супернатант переносили в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и центрифугировали в течение 6 минут при 14000 об / мин. Затем супернатант переносили в чистый сосуд, закрывали крышкой и анализировали с помощью ВЭЖХ-УФ.

Подготовка образца DPS

С помощью регулируемой микропипетки 15 мкл мкл плазмы были нанесены на центр карты сохранения белка для образцов 903. Остальная часть подготовки DPS соответствует контуру образцов DBS.

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Образцы крови с определенным уровнем гематокрита (21,2% или 33,5%) получали разбавлением эритроцитов свежезамороженной плазмой. Для каждого уровня гематокрита были сделаны шесть пятен DBS, были получены цифровые изображения DBS, и площадь пятна крови была определена с использованием формулы вычисления площади с использованием Photoshop Creative Suite 5 (Adobe Systems, Сан-Хосе, Калифорния). Полные стандартные кривые были построены для каждой концентрации гематокрита путем добавления IOT и нанесены пятнами.

DPS Коррекция эффекта гематокрита у людей

Были обнаружены образцы плазмы от 10 субъектов, содержащие диапазон гематокрита (27,9–44,8), взятые в 12 точках в течение 5 часов после болюсной инъекции ВГД. Концентрации сравнивали с образцами плазмы, не нанесенными на фильтровальную бумагу и приготовленными параллельно. График Бланда – Альтмана (разница средних) использовался для анализа соответствия между DPS и традиционными плазменными методами.

Популяция исследования

Популяция исследования состояла из 10 участников в возрасте от 41 до 82 лет со средним значением (± стандартное отклонение) 65.2 ± 13,4 года. Шесть участников были мужчинами. Пять участников были белыми, а пять — черными. Девять пациентов страдали анемией легкой степени, со средним уровнем гемоглобина 11,46 ± 1,32 г / дл и средним гематокритом 34,04 ± 4,19%. Средняя расчетная СКФ составила 33,4 ± 10,1 мл / мин на 1,73 м ² (диапазон = 18–55,9 мл / мин на 1,73 м ² ). Этиология ХБП заключалась в гипертоническом нефросклерозе у четырех участников, сахарном диабете у четырех участников и обструктивной уропатии у двух участников.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ.

Были построены фармакокинетические параметры между параллельными DPS и традиционными наборами образцов участников из плазмы ( n = 10).СКФ оценивали для каждого метода и сравнивали с использованием программного обеспечения WinNonlin (Сент-Луис, Миссури) и двухфармакокинетической модели, как описано ранее (15). Опять же, график Бланда-Альтмана использовался для проверки соответствия между двумя методами.

Валидация метода: меж- и внутридневная изменчивость

Точность и прецизионность метода определяли путем анализа повторений полных стандартных кривых в течение одного и того же цикла и в шести отдельных случаях в течение 60 дней. Были определены точность и прецизионность.Прецизионность определялась путем расчета коэффициента вариации (CV) в пределах 1 дня (внутридневная точность) и между днями (внутридневная точность). Точность определялась путем вычисления процента ошибки (наблюдаемое – прогнозируемое) × 100 / прогнозируемое.

Стандарт плазмы, приготовленный до концентрации, равной половине самой низкой точки кривой (25 µ г / мл), наносили на 903 карточки ( n = 14). Были рассчитаны площади для определения обнаруживаемости и точности. Протокол был одобрен Институциональным наблюдательным советом Университета Индианы по защите людей и Комитетом по исследованиям и развитию по делам ветеранов, и каждый субъект подписал письменное информированное согласие.

Результаты

Влияние эффекта гематокрита на DBS

Площадь пятен цельной крови с гематокритом 33,5% была примерно на 10% меньше, чем пятна с гематокритом 22,2% (, вставка). Неудивительно, что стандартная кривая, построенная с гематокритом крови 22,2% и 33,5%, давала различные ответные реакции площади пиков ВГД (). Как и ожидалось, по сравнению с образцами с 22,2% средние наклоны площади IOT в зависимости от концентрации в образцах с гематокритом 33,5% были на 37% больше.

Сравнение стандартных кривых концентраций иоталамата с площадью пика, измеренной с помощью ВЭЖХ, показывает, что более низкий гематокрит вызывает более низкое извлечение иоталамата. На вставке показано, что площадь, занимаемая пятном равного объема крови, больше при более низком гематокрите.

DPS Коррекция гематокритного эффекта у людей

Отношение между концентрацией IOT участников в DPS и плазме было отличным (). Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95, который значительно отличался от 1. Таким образом, по сравнению со стандартным методом отбора проб IOT, метод DPS дал среднюю концентрацию в парных точках выборки, которая была на 5% ниже по сравнению с плазма.График Бланда – Альтмана парных точек выборки ( n = 116) показал смещение от -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл (, вставка). Поскольку распределение различий не было нормально распределенным, что привело к появлению мегафонного или V-образного графика, мы вычислили логарифмически преобразованные различия. Смещение составило 1,7% (95% доверительный интервал = -22,3%, 21,0%).

Показана взаимосвязь между концентрацией йоталамата у участников, полученной стандартным методом, и пятнами высушенной плазмы. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,92–0,98. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 116), который показывает смещение -4 µ г / мл и пределы согласия от -38 до +30 µ г / мл.

Сравнение DPS с плазмой при оценке СКФ

Связь между расчетной СКФ в DPS и плазменных методах была превосходной (). Хотя регрессия СКФ, оцененная двумя методами, показала наклон 0.95, он не отличался значительно от 1, потому что 95% доверительный интервал наклона включал 1. График Бланда – Альтмана парных СКФ показал смещение 2 мл / мин с пределами согласия от -6 до +10 мл. / мин (, Врезка).

Показана взаимосвязь между оценкой СКФ с использованием пятна высушенной плазмы и стандартным методом. Регрессия концентрации, оцененной двумя методами, показала наклон 0,95 с доверительным интервалом 0,82–1,07. На вставке показан график Бланда – Альтмана для парных точек выборки ( n = 10), который показывает смещение 2 мл / мин с пределами согласия от –6 до +10 мл / мин.

Парные концентрации ионов плазмы и DPS в зависимости от времени для каждого из 10 субъектов показаны в. Большинство измерений мало различались между методами, указанными количественно в.

Соответствие между методами показано в виде динамики кривых распада иоталамата за 300 минут для каждого из 10 субъектов. Каждая панель представляет один предмет; треугольники обозначают стандартный метод, а кружки обозначают метод DPS.

Точность и прецизионность теста – повторного тестирования

Результаты тестирования – повторного тестирования показаны на.Точность обычно составляла от 5% до 10%, а точность — в пределах 5%. Статистически значимые, но небольшие неточности наблюдались для самых высоких и самых низких концентраций IOT. Среднее значение CV и ошибка для каждой точки стандартной кривой находились в пределах принятых критериев валидации анализа (<15%) (15). Дневные наклоны имели CV 4,7%, тогда как дневные CV наклонов составляли 3,8%. Мы измерили площадь пика с номинальной концентрацией 25 µ мкг / мл IOT в плазме. В каждом случае четко распознавался пик IOT, и площадь пика имела CV 9.7%.

Таблица 1.

Точность и прецизионность повторных испытаний

5,3 (−16,5, 10,7)

Номинальная концентрация йоталамата ( µ г / мл)	Средняя концентрация ( µ г / мл)	SD	Эффективная точность (% коэффициента отклонения)	Точность (% ошибки, 95% доверительный интервал)
Проведение дневного диагностического теста
50	48	3	2,4 (-11,3, 1,3)
100	96	7	6,9	2,7 (-10,9, 3)
200	194	26
300	300	20	6,5	2,7 (−6,8, 7)
500	511	16	3,2	5.7)
1000	1052	53	5	2.2 (-0,3, 10,8)
Производительность дневного диагностического теста
50	55	4	7,9	100 9024	103	8	7,9	3,4 (-5,2, 12)
200	212	18	8,3	3,6 (-3,3, 15,2)	31241			27	8.8	3,7 (−5,9, 13,3)
500	511	21	4	1,7 (−2,1, 6,6)
1000	1067	43 9024 (2.2, 11.2)

Мы можем быть уверены, что IOT стабильно в фильтровальной бумаге в течение 60 дней. Мы подготовили образцы DPS в первый день и повторно использовали эти стандарты для измерения межсуточной изменчивости. Наибольшее время среди измерений IOT составило 60 дней.В это время было хорошее согласие в измерении тест-повторный тест, как показано на.

Обсуждение

Результаты наших экспериментов демонстрируют разработку и валидацию простого быстрого анализа для количественной оценки концентраций ВГД и последующего определения СКФ в образцах DPS человека с помощью ВЭЖХ-УФ, показывая приемлемую корреляцию с традиционной обработкой плазмы. Некоторые выводы заслуживают внимания и будут обсуждаться.

Изменение гематокрита между образцами соответствует наблюдаемому изменению размера пятна согласованных объемов (9.8%). Большее распространение образцов с более низким гематокритом вызывает большее распределение ВГД на фильтровальной бумаге. Как и ожидалось, пробойник фиксированного диаметра, взятый из пятен с разным уровнем гематокрита, эффективно отбирает разные объемы крови. Таким образом, из образцов с более низким гематокритом извлекается более низкая концентрация ВГД. Изменение площади пика IOT не соответствует линейно увеличению площади пятна и не может быть эффективно компенсировано в этом анализе. Это открытие является особенно важным ограничением DBS при использовании у людей с ХБП, у которых может быть аномально низкий уровень гематокрита.Хотя измерение клиренса ВГД для определения СКФ у участников с тяжелой анемией не является обычным делом, по сравнению с методом DBS, использование метода DPS может дать более надежные результаты, особенно среди лиц с тяжелой анемией.

Использование плазмы на фильтровальной бумаге устраняет вариабельность уровней гематокрита за счет более сложной подготовки проб. Использование DPS требует наличия центрифуги и пробирок для сбора крови для фракционирования цельной крови. Тем не менее, подготовка образцов по-прежнему проще, чем традиционный метод плазмы, устраняя необходимость в больших объемах с помощью венозной канюли, хранения и ограничений транспортировки образцов.DPS предоставил подходящую альтернативу плазме для количественного определения концентрации ВГД в плазме у участников с ХЗП.

Важным выводом нашего исследования было то, что, несмотря на большие различия в уровнях гематокрита среди участников, не наблюдалось значительных различий в расчетной концентрации ВГД между методами. Смещение в методе парной пробы плазмы по сравнению с методом DPS было низким, а точность для каждой парной временной точки между методами находилась в пределах 15%. Кроме того, рассчитанная СКФ у участников обеспечивает точность в пределах 15% между методами, показывая, что DPS является подходящей альтернативой плазме для оценки СКФ для оценки почечной гемодинамики и стадии ХБП.

Все процессы внутридневной и междневной валидации обеспечили точность и прецизионность в рамках принятых критериев валидации анализа и показали, что аналит стабилен в фильтровальной бумаге до 60 дней (16). Площади пиков образцов в плазме всего 25 µ г / мл можно было легко визуализировать, а надежность суточного теста-повторного тестирования для оценки площади пика составляла <10%.

Ограничения этого пилотного исследования включают небольшой размер выборки участников ( n = 10). Дополнительные эксперименты с участием более крупных образцов улучшили бы статистическую мощность тестов.Дополнительным ограничением является то, что используемый в настоящее время более низкий уровень гематокрита 22,2% при сравнении распространения мажущих кровянистых выделений находится на нижних границах того, что может быть обнаружено клинически. У стабильных пациентов с ХБП меньше шансов встретить широкий диапазон уровней гематокрита. Дополнительные эксперименты, включающие более узкие диапазоны уровней гематокрита, могут быть желательными для характеристики влияния гематокрита на восстановление DBS.

Будущие эксперименты, проведенные для преодоления эффекта гематокрита, могут расширить область применения DBS для включения участников с различным уровнем гематокрита.Обнаружение известного объема и взятие всего пятна для анализа свело бы на нет эффект распределения образца и обеспечило бы анализ фиксированного объема крови.

Таким образом, мы показываем, что DBS не подходят для исследований, в которых участвуют люди с аномальным уровнем гематокрита. Тем не менее, DPS корректируют это ограничение, и они являются надежным методом для количественной оценки IOT и последующего определения GFR. Текущий метод показывает приемлемую точность, прецизионность и надежность в соответствии с общепринятыми критериями валидации.Матрица DPS может позволить осуществлять выборку групп населения, которые ранее были ограничены (педиатрические или тяжелобольные или пациенты, проживающие в отдаленных районах) из-за необходимости меньшего объема крови, а также обеспечивать более простые и экономичные средства хранения и транспортировки образцов. .

Раскрытие информации

R.A. входит в состав руководящих комитетов исследований, финансируемых Roche, Amgen, Celgene и Reata, а также в бюро спикеров Merck и Abbott, а также является консультантом Daichii Sankyo, Inc., Takeda Pharma и Sigma Tau.

Благодарность

Исследование было частично поддержано Национальными институтами здравоохранения (грант 5 U01-DK071633-05).

Сноски

Публикуется в Интернете перед печатью. Дата публикации доступна на сайте www.cjasn.org.

Ссылки

2. Флорейн К.В., Барендрегт Дж. Н., Лентес Э. Г., ван Дам В., Проджосуджади В., ван Заас Дж. Л., ван Эс Л. А., Чанг П. С. Измерение скорости клубочковой фильтрации с помощью однократной инъекции инулина. Почка Int 46: 252–259, 1994 [PubMed] [Google Scholar] 3.Agarwal R: Амбулаторное измерение СКФ с холодным йоталаматом у взрослых с хроническим заболеванием почек. Am J Kidney Dis 41: 752–759, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 4. Доулинг Т.С., Фрай Р.Ф., Фрейли Д.С., Мацке Г.Р.: Сравнение методов очистки от йоталамата для измерения СКФ. Фармакотерапия 19: 943–950, 1999 [PubMed] [Google Scholar] 5. Гатри Р., Сьюзи А.: Простой метод фенилаланина для обнаружения фенилкетонурии в больших популяциях новорожденных. Педиатрия 32: 338–343, 1963 [PubMed] [Google Scholar] 6.Мей Дж. В., Александр Дж. Р., Адам Б. В., Хэннон В. Х .: Использование фильтровальной бумаги для сбора и анализа образцов цельной крови человека. J Nutr 131: 1631S – 1636S, 2001 [PubMed] [Google Scholar] 7. Li W, Tse FL: отбор проб высушенной крови в сочетании с ЖХ-МС / МС для количественного анализа малых молекул. Биомедицинский хроматограф 24: 49–65, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 8. Нельсон К. Б., Дамброзия Дж. М., Гретер Дж. К., Филлипс Т. М.: Неонатальные цитокины и факторы свертывания крови у детей с церебральным параличом. Энн Нейрол 44: 665–675, 1998 [PubMed] [Google Scholar] 9.Патчен Л.С., Маунт Д.Л., Шварц И.К., Черчилль Ф.К .: Анализ образцов крови, абсорбированных фильтровальной бумагой, на содержание хлорохина и его основного метаболита с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием. J Хроматограф A 278: 81–89, 1983 [PubMed] [Google Scholar] 10. Спунер Н., Лад Р., Барфилд М.: Высушенные пятна крови как метод сбора образцов для определения фармакокинетики в клинических исследованиях: Соображения по валидации количественного биоаналитического метода.Анальный хим 81: 1557–1563, 2009 [PubMed] [Google Scholar] 12. Patel P, Mulla H, Tanna S, Pandya H: Содействие фармакокинетическим исследованиям у детей: новое использование сухих пятен крови. Арка Дис Дитя 95: 484–487, 2010 [PubMed] [Google Scholar] 13. Эрли А., Мискулин Д., Лэмб Э. Дж., Леви А. С., Улиг К.: Расчетные уравнения для скорости клубочковой фильтрации в эпоху стандартизации креатинина: систематический обзор. Энн Интерн Мед 156: 785–795, 2012 [PubMed] [Google Scholar] 14. Агарвал Р., Васавада Н., Чейз С.Д.: Жидкостная хроматография иоталамата в биологических образцах.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 785: 345–352, 2003 [PubMed] [Google Scholar] 15. Agarwal R, Bills JE, Yigazu PM, Abraham T., Gizaw AB, Light RP, Bekele DM, Tegegne GG: Оценка клиренса йоталамата из плазмы: Продолжительность исследования влияет на качество СКФ. Clin J Am Soc Nephrol 4: 77–85, 2009 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Shah VP, Midha KK, Findlay JW, Hill HM, Hulse JD, McGilveray IJ, McKay G, Miller KJ, Patnaik RN, Powell ML, Tonelli A, Viswanathan CT, Yacobi A: валидация биоаналитического метода — пересмотр с десятилетним прогрессом .Pharm Res 17: 1551–1557, 2000 [PubMed] [Google Scholar]

Сравнительное исследование тестирования на анти-ВГС с использованием плазмы, сухих пятен плазмы (DPS) и сухих пятен крови (DBS)

Основные моменты

•

Scientific вопрос: В нескольких исследованиях систематически сравнивались результаты образцов плазмы и образцов DPS и DBS для серологического скрининга на ВГС, и не существует общепринятой процедуры сбора образцов и обработки образцов DPS или DBS. Было проведено мало исследований для сравнения характеристик плазмы и образцов DPS и DBS

•

Доказательства перед этим исследованием: засохшие пятна на фильтровальной бумаге легко собрать и подготовить, требуется лишь небольшой объем образца, не требуется охлаждение и могут быть отправлены с минимальным риском биологической опасности.Антитела, многие лекарственные препараты и их метаболиты, а также нуклеиновые кислоты остаются стабильными в течение более длительного времени на фильтровальной бумаге, чем при обычных пробах, что обеспечивает значительную гибкость в отношении процедур сбора и транспортировки проб. Исследования показали, что использование образцов DBS может обеспечить чувствительность и специфичность при использовании для диагностики ВИЧ, HBV и HAV инфекции.

•

Новые результаты: Разработан метод ELISA на основе DBS / DPS для скрининга антител к ВГС с использованием отечественных коммерческих наборов.Систематически оценивали эффективность метода DBS / DPS ELISA для скрининга антител к HCV и проводили сравнение между DBS и DPS.

•

Значение исследования: в этом исследовании были определены дополнительные образцы DPS и DBS, которые являются многообещающей альтернативой плазме для обнаружения антител к HCV. Применение образцов DPS и DBS в качестве инструмента скрининга для выявления ВГС может облегчить скрининг групп высокого риска и лиц в труднодоступных районах.Предоставьте дополнительные справочные материалы по применению DBS / DPS, собранных из венозной крови, для диагностики заболеваний, а также для стандартизации и регуляризации DBS / DPS.

Abstract

Целью этого исследования было оценить эффективность анализа с использованием образцов высушенных пятен плазмы (DPS) и сухих пятен крови (DBS) для серологического обнаружения антител к вирусу гепатита C (HCV). В период с января по июль 2019 года образцы плазмы, DPS и DBS были собраны у лиц с высоким риском заражения HCV.Образцы были протестированы на анти-HCV с помощью ELISA, а эффективность образцов DPS и DBS была исследована с использованием результатов тестирования плазмы в качестве стандарта. Образцы крови были взяты у 329 человек, в том числе 129 мужчин, практикующих секс с мужчинами, и 200 лиц, употребляющих наркотики внутривенно. Результаты тестирования плазмы показали, что 118 образцов (59,0%) были положительными на ВГС. Данные тестирования образца DPS показали чувствительность 99,2% (95% доверительный интервал [ДИ]: 0,95–1,00) и специфичность 100% (95% доверительный интервал: 0.98–1,00) для выявления ВГС, с Каппа 99,3% (95% ДИ: 0,98–1,00), в то время как при тестировании образца DBS чувствительность составляет 98,3% (95% ДИ: 0,93–1,00), а специфичность — 100% (95% ДИ). : 0,98–1,00), с Каппа 98,7% (95% ДИ: 0,97–1,00), соответственно. Коэффициенты корреляции Спирмена для сравнений между образцами плазмы и DPS, образцами плазмы и DBS, образцами DPS и DBS составляли 0,857, 0,750 и 0,739 соответственно. По сравнению с результатами в плазме, 1 образец не был обнаружен с использованием образцов DPS, а 2 образца не были обнаружены с помощью образцов DBS.Образцы как DPS, так и DBS были многообещающей альтернативой плазме для обнаружения антител против HCV.

Ключевые слова

ВГС

Плазма

Высохшие пятна плазмы

Высохшие пятна крови

Коэффициент корреляции Спирмена

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2021 Издательский дом Китайской медицинской ассоциации. Опубликовано Elsevier B.V.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Использование сухих пятен крови для определения концентраций невирапина и эфавиренца в плазме | Журнал антимикробной химиотерапии

Аннотация

Цели

Концентрации в плазме часто используются для терапевтического мониторинга антиретровирусных препаратов.Отбор сухих капель крови — удобная и простая альтернатива отбору образцов плазмы. Однако концентрации сухих пятен крови не обязательно равны концентрациям в плазме, и поэтому целью данной работы было установить взаимосвязь между невирапином и эфавиренцем в сухих пятнах крови и концентрациями в плазме, чтобы облегчить клиническую реализацию отбора проб высушенной крови.

Методы

Парные сухие пятна крови и образцы плазмы были получены от 40 ВИЧ-инфицированных пациентов, получавших невирапин, и 40 пациентов, получавших эфавиренз.Все образцы были проанализированы с использованием проверенных методов ВЭЖХ – тандемной масс-спектрометрии для двух матриц. Теоретические концентрации в плазме рассчитывались из концентраций высушенных пятен крови по формуле [концентрация высушенных пятен крови / (1 — гематокрит)] × фракция, связанная с белками плазмы = концентрация в плазме. Для сравнения двух методов использовались линейная регрессия и анализ Бланда – Альтмана.

Результаты

Концентрации невирапина и эфавиренца в высохшей крови и плазме крови хорошо коррелировали ( r ² = 0.867 и 0,972 соответственно), хотя концентрации эфавиренца в сухих пятнах крови были на 39,8% (стандартное отклонение 7,1%) ниже, чем концентрации в плазме. Теоретические концентрации в плазме (с учетом гематокрита пациента) невирапина и эфавиренца были аналогичны измеренным концентрациям в плазме со средней разницей между двумя методами 0,29 мг / л (стандартное отклонение 1,35 мг / л) и 0,08 мг / л (стандартное отклонение 0,31 мг. / L) соответственно.

Выводы

Концентрации невирапина и эфавиренца в сухих пятнах крови были равны концентрациям в плазме после поправки на гематокрит и связывание с конкретным соединением с белками плазмы и поэтому могут использоваться в клинической практике.

Введение

Приблизительно 33,3 миллиона человек в настоящее время живут с ВИЧ. ¹ С момента внедрения комбинированного антиретровирусного лечения (АРТ) заболеваемость и смертность ВИЧ-инфицированных резко снизились. Рекомендации Европейского клинического общества по СПИДу и Министерства здравоохранения и социальных служб США рекомендуют лечение ВИЧ двумя нуклеозидными ингибиторами обратной транскриптазы в сочетании с ингибитором протеазы, ненуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы (ННИОТ) или ралтегравиром. ^2,3 К сожалению, появление резистентности и возникновение побочных эффектов часто ограничивают терапевтический успех антиретровирусных препаратов.

Концентрации в плазме ННИОТ невирапин и эфавиренц были связаны с вирусологическим исходом и токсичностью у ВИЧ-инфицированных пациентов. ^4,5 Таким образом, терапевтический мониторинг лекарственных средств (TDM) невирапина и эфавиренца рекомендуется в особых группах населения (например, дети и беременные женщины) и по отдельным показаниям (например, определенные лекарственные взаимодействия), чтобы минимизировать токсичность и максимизировать вирусологический результат. ⁶

В настоящее время TDM выполняется путем измерения концентраций в плазме. Однако отбор венозных проб имеет ряд недостатков, в том числе необходимость в обученном персонале и специализированном оборудовании для обработки проб. Кроме того, для TDM часто рекомендуется измерение минимальных уровней, что трудно выполнить в амбулаторных условиях при существующих режимах дозирования (один или два раза в день) антиретровирусных препаратов.

Сухие пятна крови (DBS) — удобная и простая альтернатива.Пациенты могут забрать DBS простым уколом пальца, после чего кровь собирается на фильтровальные бумажные карты. Этот метод ранее использовался для TDM некоторых других препаратов. ⁷ Карты можно хранить при комнатной температуре после высыхания на воздухе.

Однако, прежде чем использование DBS может быть реализовано в клинической практике, необходимо сравнение между DBS и концентрациями в плазме, поскольку концентрации DBS не обязательно равны концентрациям в плазме. Например, доля аналита, связанного с белками плазмы ( f _bpp ), и гематокрит могут влиять на концентрации DBS. ^8,9 Таким образом, целью данной работы было сравнение концентраций невирапина и эфавиренца в DBS и плазме с использованием двух ранее утвержденных методов ВЭЖХ – тандемной масс-спектрометрии (МС / МС), разработанных для этих матриц. ^10,11

Методы

Пациентов

Для этого исследования было набрано 40 ВИЧ-инфицированных пациентов, получавших режим эфавиренца, и 40 ВИЧ-инфицированных пациентов, получавших невирапин, из амбулаторной клиники больницы Slotervaart, Амстердам, Нидерланды.Количество пациентов было основано на рекомендациях по сравнению методов и оценке систематической ошибки с использованием выборок пациентов из CLSI. ¹² Никаких дополнительных критериев включения, кроме схемы, не использовалось. Пациенты были набраны в период с декабря 2010 года по май 2011 года. Характеристики пациентов были получены из файлов пациентов. Кроме того, пациентов спрашивали о сроках последнего приема эфавиренца или невирапина. Это исследование было одобрено местным комитетом по этике, и каждый участник дал информированное согласие перед забором крови.

Отбор проб

образца DBS были получены в течение 5 минут после венепункции для сбора цельной крови с ЭДТА от каждого пациента во время регулярных посещений поликлиники. Образцы плазмы получали из образцов цельной крови с ЭДТА после центрифугирования и хранили при -20 ° C до дальнейшего анализа. После стерильной очистки кожи был произведен прокол ланцета для отбора проб DBS. Первую каплю крови отбрасывали, а последующие капли крови собирали на бумажных фильтрах (карта Protein Saver 903, Whatman Nederland B.В., Ден Бош, Нидерланды). После сушки на воздухе в течение ночи образцы DBS хранили при комнатной температуре в пакете из фольги с упаковкой с влагопоглотителем в соответствии с инструкциями производителя до дальнейшего анализа.

Биоанализ

Биоанализ концентраций невирапина и эфавиренца был выполнен с использованием двух ранее утвержденных анализов ВЭЖХ – МС / МС для определения ННИОТ и ингибиторов протеаз в плазме и DBS. ^10,11 Короче говоря, предварительная обработка образца плазмы состояла из осаждения белка смесью метанола и ацетонитрила (50:50, об. / Об.), Которая содержала внутренние стандарты.Для DBS аналиты экстрагировали из перфорированного диска диаметром 0,6 см, соответствующего ∼15 мкл цельной крови, с использованием смеси метанола, ацетонитрила и 0,2 М сульфата цинка в воде (1: 1: 2, об. / Об. / v) с внутренними стандартами. Хроматографическое разделение выполняли на колонке C18 с обращенной фазой со ступенчатым градиентом с использованием подвижной фазы, состоящей из метанола с 10 мМ буфером ацетата аммония pH 5 (35:65, об. / Об.) И метанола. Тройной квадрупольный масс-спектрометр API 3000, работающий в режиме положительной ионизации, использовали для количественного определения невирапина и эфавиренца (массовые переходы 267/226 и 316/244 m / z , соответственно).Для определения невирапина и эфавиренца в плазме были приготовлены калибровочные стандарты и стандарты контроля качества в плазме. Анализ был валидирован в диапазоне 0,1–20 мг / л с точностью от 89,8% до 99,9% и погрешностью <8,1%. Скорость восстановления была высокой и воспроизводимой (82,5–99,6%, стандартное отклонение ≤4,7% и 85,3–97,2%, стандартное отклонение ≤6,2%, для невирапина и эфавиренца, соответственно), а подавление ионов было <10% для обоих соединений. Для метода DBS образцы для калибровки и контроля качества были свежеприготовлены в DBS.Утвержденный диапазон для метода DBS был аналогичен диапазону для метода плазмы, с точностью и неточностью от 98,3% до 104,2% и от 3,4% до 12,3%, соответственно. Скорость восстановления была высокой и воспроизводимой (100,1–103,6%, стандартное отклонение ≤15,3% и 101,8% –104,4%, стандартное отклонение ≤17,5% для невирапина и эфавиренца, соответственно), а подавление ионов оказалось незначительным. Невирапин и эфавиренц были стабильны в течение как минимум 7 месяцев в DBS при хранении при комнатной температуре в пакете из фольги с упаковкой с влагопоглотителем (наши собственные неопубликованные данные о стабильности).

Статистика

Характеристики пациентов были описаны с использованием стандартных описательных методов. DBS и концентрации в плазме сравнивали с использованием линейной регрессии. Кроме того, теоретические концентрации в плазме рассчитывали из концентраций DBS по следующей формуле: [DBS _{[аналит]} / (1 — гематокрит)] × f _bpp = _{[аналит] в плазме.} f _bpp было 0,6 и 0.995 для невирапина и эфавиренца соответственно. ¹³ Чтобы упростить использование этого метода в клинической практике, теоретические концентрации в плазме были рассчитаны на основе концентраций DBS с использованием среднего значения гематокрита для мужчин (0,45 л / л), поскольку наша амбулаторная популяция ВИЧ состоит в основном из мужчин. ¹⁴ Обе теоретические концентрации в плазме сравнивались с измеренными концентрациями в плазме с использованием линейной регрессии и подхода Бланда-Альтмана. ¹⁵ Парный тест t использовался для оценки различий между теоретическими концентрациями в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента и средних значений гематокрита для мужчин.Кроме того, измеренные концентрации эфавиренца в плазме, а также теоретические концентрации эфавиренца в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента или среднего гематокрита мужчин были классифицированы в соответствии с международным консенсусом по TDM эфавиренца, чтобы продемонстрировать клиническую применимость выборки DBS. ² Уровни в плазме <1,0 мг / л увеличивают вероятность вирусологической недостаточности, в то время как побочные эффекты со стороны центральной нервной системы усиливаются при уровнях в плазме> 4,0 мг / л. Уровни плазмы между 1.0 и 4,0 мг / л считаются адекватными. Парные результаты сравнивались на предмет расхождений в классификации, которые могли привести к другому клиническому вмешательству. Категоризация невирапина не проводилась, поскольку терапевтический диапазон не установлен для суточной дозы 400 мг.

Результаты

Пациентов

Характеристики 80 включенных пациентов суммированы в таблице 1. Большинство пациентов были мужчинами (94%) с хорошим иммунологическим и вирусологическим статусом.Ни у одного из включенных пациентов вирусная нагрузка не превышала 50 копий / мл. Среднее количество клеток CD4 составило 621 клетка / мм ³ (диапазон 116–1560 клеток / мм ³ ). Что касается эфавиренца, все пациенты получали одобренную дозу 600 мг один раз в сутки. Что касается невирапина, большинство пациентов ( n = 28) получали дозу 400 мг один раз в сутки, 11 пациентов получали утвержденную дозу 200 мг два раза в сутки и 1 пациент принимал дозу 500 мг один раз в сутки. Наиболее часто используемым остовом аналогов нуклеозидов был тенофовир / эмтрицитабин ( n = 58).Другими нуклеозидными скелетами были ламивудин / тенофовир ( n = 5), абакавир / ламивудин ( n = 4), зидовудин / ламивудин ( n = 8), тенофовир ( n = 3), тенофовир / абакавир ( n = 1) и ламивудин ( n = 1). Ралтегравир вводили одновременно двум пациентам, тогда как усиленные атазанавир и саквинавир одновременно вводили одному пациенту.

Таблица 1.

Характеристики пациентов из 80 включенных пациентов (40 на лечении невирапином и 40 на лечении эфавиренцем)

Характеристика .	Невирапин, n = 40 .	эфавиренц, n = 40 .
Наружный, нет. (%) субъектов	38 (95)	37 (92,5)
Возраст (лет), средний (диапазон)	52 (29–74)	49 (29–64)
Уровень РНК ВИЧ, № (%) субъектов
<20 копий / мл	37 (92.5)	36 (90)
≥20 до <50 копий / мл	3 (7,5)	4 (10)
Число CD4 / мм 3 , шт. (%) субъектов
<200	0 (0)	2 (5)
≥200 до <350	5 (12,5)	4 (10)
≥350	35 (87,5)	34 (85)
Гематокрит (л / л), среднее (диапазон)	0.43 (0,34–0,49)	0,43 (0,32–0,49)
Альбумин (г / л), среднее значение (диапазон)	43 (38–50)	40 (33–45)

Характеристика .	Невирапин, n = 40 .	эфавиренц, n = 40 .
Наружный, нет. (%) субъектов	38 (95)	37 (92,5)
Возраст (лет), средний (диапазон)	52 (29–74)	49 (29–64)
Уровень РНК ВИЧ, №(%) субъектов
<20 копий / мл	37 (92,5)	36 (90)
≥20 до <50 копий / мл	3 (7,5)	4 (10)
Кол-во CD4 / мм 3 , шт. (%) субъектов
<200	0 (0)	2 (5)
≥200 до <350	5 (12,5)	4 (10)
≥350	35 (87.5)	34 (85)
Гематокрит (L / L), средний (диапазон)	0,43 (0,34–0,49)	0,43 (0,32–0,49)
Альбумин (г / л), среднее (диапазон)	43 (38–50)	40 (33–45)

Таблица 1.

Характеристики пациентов из 80 включенных пациентов (40 на лечении невирапином и 40 на лечении эфавиренцем)

Характеристика .	Невирапин, n = 40 .	эфавиренц, n = 40 .
Наружный, нет. (%) субъектов	38 (95)	37 (92,5)
Возраст (лет), средний (диапазон)	52 (29–74)	49 (29–64)
Уровень РНК ВИЧ, № (%) субъектов
<20 копий / мл	37 (92,5)	36 (90)
≥20 до <50 копий / мл	3 (7.5)	4 (10)
Кол-во CD4 / мм 3 , шт. (%) субъектов
<200	0 (0)	2 (5)
≥200 до <350	5 (12,5)	4 (10)
≥350	35 (87,5)	34 (85)
Гематокрит (л / л), средний (диапазон)	0,43 (0,34–0,49)	0,43 (0,32–0,49)
Альбумин (г / л), среднее (диапазон)	43 (38–50)	40 (33–45)

Характеристика .	Невирапин, n = 40 .	эфавиренц, n = 40 .
Наружный, нет. (%) субъектов	38 (95)	37 (92,5)
Возраст (лет), средний (диапазон)	52 (29–74)	49 (29–64)
Уровень РНК ВИЧ, № (%) субъектов
<20 копий / мл	37 (92.5)	36 (90)
≥20 до <50 копий / мл	3 (7,5)	4 (10)
Число CD4 / мм 3 , шт. (%) субъектов
<200	0 (0)	2 (5)
≥200 до <350	5 (12,5)	4 (10)
≥350	35 (87,5)	34 (85)
Гематокрит (л / л), среднее (диапазон)	0.43 (0,34–0,49)	0,43 (0,32–0,49)
Альбумин (г / л), среднее значение (диапазон)	43 (38–50)	40 (33–45)

DBS в сравнении с концентрацией в плазме

Взаимосвязь между концентрациями невирапина и эфавиренца в DBS и плазме показана на рисунке 1 и показала хорошие корреляции ( r ² = 0,867 и 0,972 для невирапина и эфавиренца, соответственно). Однако концентрация DBS эфавиренца составляла 39.На 8% (стандартное отклонение 7,1%) ниже, чем соответствующие концентрации в плазме. Для невирапина DBS и соответствующие концентрации в плазме были почти идентичными. Линейная зависимость между теоретическими концентрациями невирапина и эфавиренца в плазме {с использованием формулы [DBS _{[аналит]} / (1 — гематокрит)] × f _bpp = _{[аналит]} в плазме с гематокритом конкретного пациента} и измеренная концентрации в плазме показаны на рис. 2 (а) и 2 (б) соответственно. Отношения почти соответствовали линии истинной идентичности.При использовании среднего гематокрита для мужчин для расчета теоретической концентрации в плазме наблюдались аналогичные графики ( r ² = 0,867 и 0,972 для невирапина и эфавиренца, соответственно). На рис. 3 показаны графики Бланда – Альтмана для обоих соединений с использованием гематокрита для конкретного пациента и среднего гематокрита для мужчин. Средняя разница в концентрациях невирапина и эфавиренца между теоретической концентрацией в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента и измеренной концентрацией в плазме составила 0.29 мг / л (стандартное отклонение 1,35 мг / л) и 0,08 мг / л (стандартное отклонение 0,31 мг / л), соответственно, тогда как эта разница составила 0,43 мг / л (стандартное отклонение 1,21 мг / л) и 0,17 мг / л (стандартное отклонение 0,29 мг. / L) при использовании среднего гематокрита для мужчин. Средние различия между этими двумя методами достоверно различались как для невирапина, так и для эфавиренца ( P = 0,007 и 0,009, соответственно). В таблице 2 показаны расхождения в классификации эфавиренца. В 10% ( n = 4) случаев теоретические концентрации в плазме были классифицированы иначе, чем соответствующие концентрации в плазме.

Таблица 2.

Сравнение 40 образцов, классифицированных с использованием теоретических концентраций эфавиренца в плазме, и измеренных концентраций в плазме

.	.	Теоретические уровни в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента (средний мужской гематокрит) .
.	.	<1,0 (мг / л) .	> 1,0 и <4,0 (мг / л) .	> 4,0 (мг / л) .
Уровни в плазме	<1,0 (мг / л)	2 (2)	1 (1)	0 (0)
	> 1,0 и <4,0 (мг / л) )	1 (1)	36 (36)	1 (1)
	> 4,0 (мг / л)	0 (0)	1 (1)	2 (2)

.	.	Теоретические уровни в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента (средний мужской гематокрит) .
.	.	<1,0 (мг / л) .	> 1,0 и <4,0 (мг / л) .	> 4,0 (мг / л) .
Уровни в плазме	<1,0 (мг / л)	2 (2)	1 (1)	0 (0)
	> 1.0 и <4,0 (мг / л)	1 (1)	36 (36)	1 (1)
	> 4,0 (мг / л)	0 (0)	1 (1)	2 (2)

Таблица 2.

Сравнение 40 образцов, классифицированных с использованием теоретических концентраций эфавиренца в плазме, и измеренных концентраций в плазме

.	.	Теоретические уровни в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента (средний мужской гематокрит) .
.	.	<1,0 (мг / л) .	> 1,0 и <4,0 (мг / л) .	> 4,0 (мг / л) .
Уровни в плазме	<1,0 (мг / л)	2 (2)	1 (1)	0 (0)
	> 1,0 и <4,0 (мг / л) )	1 (1)	36 (36)	1 (1)
	> 4.0 (мг / л)	0 (0)	1 (1)	2 (2)

.	.	Теоретические уровни в плазме с использованием гематокрита для конкретного пациента (средний мужской гематокрит) .
.	.	<1,0 (мг / л) .	> 1,0 и <4,0 (мг / л) .	> 4,0 (мг / л) .
Уровни в плазме	<1,0 (мг / л)	2 (2)	1 (1)	0 (0)
	> 1,0 и <4,0 (мг / л) )	1 (1)	36 (36)	1 (1)
	> 4,0 (мг / л)	0 (0)	1 (1)	2 (2)

Рисунок 1.

Концентрации DBS в зависимости от концентрации в плазме для (а) невирапина и (б) эфавиренца. Прерывистая линия — это линия истинной идентичности.

Рисунок 1.

Концентрации DBS в зависимости от плазменных концентраций для (а) невирапина и (б) эфавиренца. Прерывистая линия — это линия истинной идентичности.

Рисунок 2.

Теоретические концентрации в плазме в зависимости от измеренных концентраций в плазме для (а) невирапина и (б) эфавиренца.Прерывистая линия — это линия истинной идентичности.

Рисунок 2.

Теоретические концентрации в плазме в зависимости от измеренных концентраций в плазме для (а) невирапина и (б) эфавиренца. Прерывистая линия — это линия истинной идентичности.

Рисунок 3.

Графики Бланда – Альтмана для (а) концентраций невирапина и (б) эфавиренца с использованием измеренного гематокрита и (в) концентраций невирапина и (г) эфавиренца с использованием среднего гематокрита мужчин. Непрерывная линия представляет собой среднее значение, а пунктирные линии представляют 95% доверительный интервал (± 2 SD).

Рисунок 3.

Графики Бланда – Альтмана для (а) концентраций невирапина и (б) эфавиренца с использованием измеренного гематокрита и (в) концентраций невирапина и (г) эфавиренца с использованием среднего гематокрита мужчин. Непрерывная линия представляет собой среднее значение, а пунктирные линии представляют 95% доверительный интервал (± 2 SD).

Обсуждение

В этом исследовании мы продемонстрировали, что концентрации невирапина и эфавиренца в DBS показали хорошее соответствие с концентрациями в плазме после поправки на гематокрит и связывание специфических белков плазмы.

Ранее в четырех исследованиях оценивалась корреляция между концентрациями антиретровирусных препаратов в DBS и плазме. Ван Шоуневельд и др. . ¹⁶ продемонстрировали на 48 отдельных образцах пациентов, что концентрации DBS атазанавира хорошо коррелировали с концентрациями в плазме ( r ² = 0,988), хотя концентрации DBS были немного ниже (-10,8%), чем концентрации в плазме. Коал и др. . ¹⁷ проанализировали 70 образцов пациентов (лопинавир, атазанавир, ритонавир, саквинавир и эфавиренц) на предмет концентраций DBS и плазмы.Суммарная кривая корреляции показала хорошую корреляцию ( r ² = 0,9772) для всех соединений; однако концентрации DBS снова были немного ниже (-15%), чем соответствующие концентрации в плазме. Meesters и др. . ¹⁸ показали корреляцию между лопинавиром и ритонавиром в 19 DBS и образцах плазмы от детей ( r ² = 0,8487 и 0,7679, соответственно). Однако эти образцы DBS были получены из образцов цельной крови (а не из укола пальца), и оценка систематической ошибки не проводилась.Наша группа ранее показала, что концентрации в DBS этравирина, дарунавира, ралтегравира и ритонавира были пропорциональны концентрациям в плазме, полученным из пробирок с препаратами клеток. ¹⁹ Таким образом, все предыдущие авторы сообщили, что концентрации DBS и плазмы хорошо коррелировали, хотя концентрации не были идентичными. Это исследование показало аналогичные результаты; Концентрации DBS невирапина и эфавиренца хорошо коррелировали с концентрациями в плазме, хотя концентрации DBS эфавиренца составляли 39.На 8% (стандартное отклонение 7,1%) ниже, чем концентрация в плазме. Ни один из предыдущих авторов не исследовал механизм несходства между DBS и концентрациями в плазме. Однако теперь мы показываем, что разницу в концентрациях DBS и в плазме можно очень хорошо объяснить специфическим для соединения связыванием с белками плазмы и гематокритом с использованием адаптированной версии формулы, ранее предложенной Li и Tse. ⁹

Средняя разница между измеренными и теоретическими концентрациями в плазме с использованием измеренного гематокрита для невирапина и эфавиренца составила 0.29 и 0,08 мг / л соответственно. Это различие могло привести к различным клиническим решениям в 10% случаев эфавиренца (таблица 2). Однако в клинической практике эта разница может быть менее выраженной, поскольку расхождения между концентрациями, отнесенными к разным категориям, были небольшими. Например, в двух из четырех случаев все концентрации эфавиренца составляли около 1,0 мг / л (1,01, 0,68 и 0,89, 1,00 мг / л для измеренных концентраций в плазме и теоретической концентрации в плазме с учетом гематокрита для конкретного пациента, соответственно).Коррекция дозы не рекомендуется при измеренной концентрации в плазме 1,01 мг / л в соответствии с категоризацией. Однако, поскольку эта концентрация находится на границе приемлемости, в клинической практике может быть рекомендовано увеличение дозы, если у конкретного пациента вирусологически неэффективно, несмотря на соблюдение режима лечения. Таким образом, несмотря на различную категоризацию измеренных и теоретических концентраций в плазме, клиническая практика у этих пациентов может быть схожей.

Средняя разница между измеренными концентрациями в плазме и теоретическими концентрациями в плазме с использованием среднего гематокрита для мужчин (0.43 и 0,17 мг / л для невирапина и эфавиренца соответственно) была значительно выше, чем средняя разница между измеренными концентрациями в плазме и теоретическими концентрациями в плазме с использованием измеренного гематокрита ( P = 0,007 и 0,009 для невирапина и эфавиренца, соответственно). Однако не было обнаружено никакой разницы в классификации эфавиренца, что свидетельствует о том, что оба метода работают одинаково при использовании для целей TDM.

Ограничением этого исследования является то, что мы не исследовали специфическое для пациента связывание белков плазмы и связывание с эритроцитами.В среднем эфавиренц сильно связывается (99,5%) с белками плазмы, в основном с альбумином, тогда как связывание невирапина с белками плазмы составляет ~ 60%. ¹³ Вариабельность уровней альбумина между пациентами может привести к вариабельности связывания белков плазмы между пациентами, что приведет к некоторой систематической ошибке. Однако мы исследовали уровни альбумина у всех пациентов и обнаружили, что уровень альбумина находится в пределах нормы (35–50 г / л), за исключением одного пациента (33 г / л). Таким образом, вариабельность связывания эфавиренца и невирапина с белками плазмы в этой популяции считается минимальной, что ограничивает потенциальную систематическую ошибку.Кроме того, считается, что связывание невирапина и эфавиренца с эритроцитами ограничено. Связывание невирапина и эфавиренца с эритроцитами может вызвать смещение при расчете концентраций в плазме на основе концентраций DBS. Однако мы показали, что концентрации в плазме можно адекватно предсказать по связыванию с белками плазмы и гематокриту. Это указывает на то, что предпочтительное поглощение эритроцитами было минимальным, чего можно ожидать из относительно высокого связывания обоих препаратов с белками плазмы.Еще одно ограничение заключается в том, что в нашу исследуемую популяцию в основном входили пациенты мужского пола. Поэтому для расчета концентраций в плазме мы использовали средний гематокрит мужчин. Поскольку средний гематокрит женщин и детей различается, необходимо подтверждение наших результатов в этих популяциях.

В заключение, результаты этого исследования позволяют проводить отбор проб невирапина и эфавиренца с помощью DBS для целей TDM. Теоретическая концентрация в плазме может быть рассчитана на основе концентраций DBS по формуле: [DBS _{[аналит]} / (1 — гематокрит)] × f _bpp .Так, например, для эфавиренца ( f _bpp = 0,995) концентрация DBS 1,2 мг / л соответствует теоретической концентрации в плазме 2,2 мг / л {[1,2 / (1–0,45)] × 0,995}. Это открывает возможности для TDM в особых группах населения, таких как дети и беременные женщины, где ранее разрешался только ограниченный отбор проб по этическим соображениям, а также в условиях ограниченных ресурсов, где оборудование для отбора проб плазмы часто недоступно. В настоящее время продолжается оценка других антиретровирусных препаратов.

Финансирование

Работа поддержана внутренним финансированием.

Заявления о прозрачности

Не подлежат декларированию.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить отделение клинической химии за помощь в наборе пациентов.

Список литературы

1

ЮНЭЙДС

Глобальный отчет: Отчет ЮНЭЙДС о глобальной эпидемии СПИДа, 2010 г.

2

Группа экспертов по антиретровирусным рекомендациям для взрослых и подростков, Департамент здравоохранения и социальных служб

,

Руководство по использованию антиретровирусных агентов у лиц, инфицированных ВИЧ-1 Взрослые и подростки

3

Европейское клиническое общество по СПИДу

,

Руководство по лечению ВИЧ-инфицированных взрослых в Европе, версия 6.0, октябрь 2011 г.

4«, et al.

Низкие концентрации невирапина в плазме позволяют прогнозировать вирусологическую неудачу у неотобранной ВИЧ-1-инфицированной популяции

,

Clin Pharmacokinet

,

2003

, vol.

42

(стр.

599

—

605

) 5« и др.

Фармакокинетические параметры невирапина и эфавиренца в зависимости от антиретровирусной эффективности

,

Ретровирусы AIDS Res Hum

,

2006

, vol.

22

(стр.

232

—

9

) 6.

Роль терапевтического мониторинга лекарственных средств в педиатрической борьбе с ВИЧ / СПИДом

,

Ther Drug Monit

,

2010

, vol.

32

(стр.

269

—

72

) 7,,.

Методы сухих пятен в терапевтическом лекарственном мониторинге: методы, анализы, подводные камни

,

Ther Drug Monit

,

2009

, vol.

31

(стр.

327

—

36

) 8,.

Влияние гематокрита на систематическую ошибку анализа при использовании образцов DBS для количественного биоанализа лекарственных препаратов

,

Bioanalysis

,

2010

, vol.

2

(стр.

1385

—

95

) 9,.

Отбор проб сухой крови в сочетании с ЖХ-МС / МС для количественного анализа малых молекул

,

Biomed Chromatogr

,

2010

, vol.

24

(стр.

49

—

65

) 10,,, et al.

Количественное определение ингибиторов протеаз и ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы в сухих пятнах крови методом жидкостной хроматографии и тройной квадрупольной масс-спектрометрии

,

J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci

,

2008

, vol.

867

(стр.

205

—

12

) 11« и др.

Быстрое и одновременное определение дарунавира и одиннадцати других антиретровирусных препаратов для терапевтического мониторинга лекарственных средств: разработка и валидация метода для определения всех одобренных в настоящее время ингибиторов протеазы ВИЧ и ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы в плазме человека с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной массой с ионизацией электрораспылением спектрометрия

,

Rapid Commun Mass Spectrom

,

2007

, т.

21

(стр.

2505

—

14

) 12

Институт клинических и лабораторных стандартов

,

Сравнение методов и оценка систематической ошибки с использованием образцов пациентов — второе издание (промежуточная редакция): Утвержденное руководство EP09-A2-IR

,

2005

Уэйн, Пенсильвания, США

CLSI

13« и др.

Связывание белков в антиретровирусной терапии

,

Ретровирусы AIDS Res Hum

,

2003

, vol.

19

(стр.

825

—

35

) 14« и др.,

Life: The Science of Biology

,

2004

Sunderland

Sinauer Associates

15,.

Статистические методы оценки соответствия двух методов клинических измерений

,

Lancet

,

1986

, vol.

i

(стр.

307

—

10

) 16« и др.

Клиническая оценка анализа сухих пятен крови на атазанавир

,

Противомикробные агенты Chemother

,

2010

, vol.

54

(стр.

4124

—

8

) 17« и др.

Количественное определение антиретровирусных препаратов в образцах сухих пятен крови с помощью жидкостной хроматографии / тандемной масс-спектрометрии

,

Rapid Commun Mass Spectrom

,

2005

, vol.

19

(стр.

2995

—

3001

) 18,,, et al.

Сверхбыстрый и высокопроизводительный масс-спектрометрический анализ для терапевтического мониторинга антиретровирусных препаратов при детской ВИЧ-1-инфекции с использованием сухих пятен крови

,

Anal Bioanal Chem

,

2010

, vol.

398

(стр.

319

—

28

) 19« и др.

Клиническая оценка определения плазменных концентраций дарунавира, этравирина, ралтегравира и ритонавира в сухих образцах пятен крови

,

Bioanalysis

,

2011

, vol.

3

(стр.

1093

—

7

)

© Автор, 2012. Опубликовано Oxford University Press от имени Британского общества антимикробной химиотерапии.Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

. .